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甘蓝型油菜丙酮酸激酶基因RNA干扰载体的构建(英文)

文献类型： 中文期刊

作者： 付三雄 1 ; 张超 1 ; 陈松 1 ; 周晓婴 1 ; 戚存扣 1 ;

作者机构： 1.国家油菜改良中心南京分中心/农业部长江下游棉花与油菜重点实验室/江苏省农业科学院经济作物研究所

关键词： 甘蓝型油菜;丙酮酸激酶;RNA干扰;载体构建

期刊名称： Agricultural Science & Technology

ISSN： 1009-4229

年卷期： 2014 年 05 期

页码： 39-44

摘要： 采用基因芯片技术,从油菜中鉴定了一个油分积累优势表达基因即丙酮酸激酶(Pyruvate kinase,PK)基因。为构建甘蓝型油菜PK基因的RNA干扰(RNAi)载体,通过设计引物克隆了PK基因长498 bp的siRNA靶序列,连接到pEASY-T1载体上,采用NotI和XhoI酶切,酶切产物连接到本课题组新近改造的RNAi平台载体pHurricane的NotI和XhoI位点,通过多重PCR鉴定证实载体构建成功,然后将上述PK基因反向重复框克隆到加入napin启动子的pCAMBIA1390表达载体相应的酶切位点上,构建具有种子特异性表达的PK基因的RNAi载体。限制性内切酶酶切证实载体构建成功,为进一步研究PK基因参与决定油菜油分积累的分子机理和代谢调控奠定了基础。

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