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抗病转基因大豆事件B4J8049外源T-DNA整合位点分析及特异性检测

文献类型： 中文期刊

作者： 包婉莹 1 ; 仲晓芳 1 ; 杜茜 1 ; 赵倩倩 1 ; 杨向东 1 ;

作者机构： 1.吉林师范大学生命科学学院;吉林省农业科学院农业生物技术研究所/吉林省农业生物技术重点实验室

关键词： hrpZm;转基因大豆;整合位点;侧翼序列;事件特异性检测

期刊名称： 东北农业科学

ISSN： 2096-5877

年卷期： 2018 年 05 期

页码： 21-26

摘要： 大豆疫霉根腐病是由卵菌纲病原菌—疫霉菌(Phytophthora sojae)引起的大豆毁灭性病害之一。本研究前期利用农杆菌介导转化技术,将广谱抗病基因hrpZm导入栽培大豆Williams 82,获得高抗疫霉根腐病转基因大豆新品系B4J8049,并已进入环境释放试验阶段。为进一步推进该转化事件的生物安全评价及应用,本研究采用热不对称交错PCR(thermal asymmetric interlaced PCR,TAIL-PCR)方法分析外源T-DNA整合位点右边界序列,并依据其序列特征,建立该转化事件特异性检测方法。Southern杂交检测结果表明,转基因大豆事件B4J8049外源T-DNA插入拷贝数为1个。根据外源T-DNA插入片段序列设计3条嵌套特异性检测引物,与简并引物组合进行TAIL-PCR扩增反应,获得外源TDNA插入位点右边界序列。BLAST分析(https://soybase.org/)表明,外源T-DNA片段以单拷贝形式反向插入的方式整合到大豆基因组中第8号染色体的187 824位点。在此基础上,依据插入位点右边界序列设计检测引物,建立转基因大豆事件B4J8049特异性检测方法。本研究为该抗病转基因事件B4J8049及其衍生产品特异性检测提供依据。

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