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黄喉拟水龟巨噬细胞炎症蛋白-3α重组表达及抗菌活性分析

文献类型： 中文期刊

作者： 龙建杰 1 ; 朱新平 1 ; 史燕 1 ; 赵建 1 ; 洪孝友 1 ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院珠江水产研究所

关键词： 黄喉拟水龟;巨噬细胞炎症蛋白-3α;重组表达;抗菌活性

期刊名称： 水产学报

ISSN： 1000-0615

年卷期： 2013 年 37 卷 04 期

页码： 116-121

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 巨噬细胞炎症蛋白-3α是一种可诱导的分泌蛋白,通过相应受体对多种免疫细胞产生趋化,在多种疾病的免疫反应和炎症损伤中发挥重要作用。实验采用RT-PCR技术克隆出黄喉拟水龟巨噬细胞炎症蛋白-3α(MaCCL20)的成熟肽基因序列,通过双酶切将目的基因序列插入到表达载体pET-32a上,然后转化进大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导后表达出了pET-32a-CCL20融合蛋白,以该融合蛋白为抗原制备多克隆抗体并进行Western-blotting鉴定及抑菌性检测。实验表明,融合蛋白在37℃、0.8 mmol/L IPTG,4 h条件下得到高效表达;经SDS-PAGE凝胶电泳和Western-blotting分析显示,所表达融合蛋白相对分子量为30 ku,与预测蛋白大小一致并与带His标签的多克隆抗体发生特异性反应。经His Bind镍柱纯化后SDS-PAGE电泳检测出现单一条带,说明获得了纯度较高的MaCCL20重组蛋白。抑菌实验表明,MaCCL20重组蛋白对金黄色葡萄球菌、粘质沙雷氏菌和嗜水气单胞菌都有较强的抑菌作用。

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