文献类型： 中文期刊

作者： 吴艳 ¹ ; 皮劲松 ¹ ; 张昊 ¹ ; 梁振华 ¹ ; 杜金平 ¹ ; 潘爱銮 ¹ ; 申杰 ¹ ; 蒲跃进 ¹ ;

作者机构： 1.湖北省农业科学院畜牧兽医研究所

关键词： 蛋鸭;miR-145-4;PIK3CA;颗粒细胞凋亡

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2022 年 003 期

页码： 809-816

收录情况： 北大核心

摘要： 【目的】本研究旨在揭示miR-145-4在蛋鸭卵泡发育中的作用及调控机制。【方法】分离培养蛋鸭卵泡颗粒细胞，转染miR-145-4相似物（mimic）、抑制物（inhibitor）后，利用实时荧光定量PCR法检测细胞增殖凋亡相关基因的表达情况，采用RNAhybrid和Targetscan程序预测miR-145-4的靶基因及其与靶基因磷脂酰肌醇-3-激酶催化亚单位α（phosphatidylinositol-3-kinase catalytic subunitα，PIK3CA）3′-UTR的结合位点，分别构建PIK3CA基因3′-UTR的野生型和突变型双荧光素酶载体，与miR-145-4mimic和mimic-NC共转染蛋鸭卵泡颗粒细胞后，采用双荧光素酶报告系统验证miR-145-4与靶基因PIK3CA的结合关系，最后采用实时荧光定量PCR法检测miR-145-4对蛋鸭卵泡颗粒细胞中PIK3CA基因表达的影响。【结果】实时荧光定量PCR结果显示，与对照组相比，过表达miR-145-4后CyclinB2基因的表达量极显著降低（P<0.01）,BCL2基因的表达量极显著增加（P<0.01）；抑制miR-145-4后，CyclinB2基因表达量极显著升高（P<0.01）,BCL2基因表达量极显著降低（P<0.01）。预测结果显示，miR-145-4与PIK3CA基因3′-UTR存在结合位点。PCR扩增和测序结果显示，PIK3CA基因3′-UTR的野生型和突变型载体构建成功。双荧光素酶检测结果显示，与突变型及空载体共转染组相比，野生型组双荧光素酶活性显著降低（P<0.05），说明miR-145-4能够与PIK3CA基因3′-UTR结合。实时荧光定量PCR结果表明，在蛋鸭卵泡颗粒细胞中过表达miR-145-4后，PIK3CA基因表达量显著降低（P<0.05），而抑制miR-145-4后，PIK3CA基因表达量极显著升高（P<0.01）。【结论】miR-145-4通过正向调控靶基因PIK3CA促进蛋鸭卵泡颗粒细胞的凋亡，进而调控蛋鸭的卵泡发育。