文献类型： 中文期刊

作者： 王冬雨 ¹ ; 魏蔷 ¹ ; 刘运超 ¹ ; 刘畅 ¹ ; 杨棋 ¹ ; 崔颖磊 ¹ ; 张改平 ¹ ;

作者机构： 1.河南农业大学牧医工程学院;河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室;吉林大学动物医学学院;江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心

关键词： 猪瘟病毒;E2蛋白;蛋白质纯化;血清学分析;免疫原性

期刊名称： 河南农业科学

ISSN： 1004-3268

年卷期： 2018 年 03 期

页码： 128-133+143

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为制备具有免疫原性的猪瘟病毒E2蛋白,在大肠杆菌中表达E2蛋白,并对其进行纯化及免疫原性分析。将E2基因插入原核表达载体p ET-28a,构建重组质粒p ET-28a-E2,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot分析结果显示,成功表达了可溶性E2蛋白。对IPTG浓度及诱导温度和时间进行优化,结果显示,IPTG终浓度为0.1 mmol/L时,18℃条件下诱导表达16 h,E2蛋白的可溶性表达量最高。通过分子筛一步纯化E2蛋白,其终质量浓度为0.5 g/L。Western blot分析和间接ELISA结果显示,纯化后的E2蛋白在变性及非变性条件下都能够被猪瘟阳性血清特异性识别,表明纯化后的E2蛋白活性良好。将纯化后的E2蛋白添加弗氏佐剂乳化后免疫BALB/C小鼠,采集血清进行病毒中和试验,结果显示,免疫后56 d产生较高水平的中和抗体,表明E2蛋白免疫原性良好。综上,成功利用大肠杆菌BL21(DE3)菌株表达了可溶性E2蛋白,且纯化后的E2蛋白免疫原性良好。