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大肠杆菌β-葡萄糖苷酸酶基因的体外分子进化研究

文献类型： 会议论文

第一作者： 熊爱生

作者： 熊爱生 1 ; 姚泉洪 1 ; 彭日荷 1 ; 陈建民 2 ; 李贤 1 ; 范惠琴 1 ;

作者机构： 1.上海市农业遗传育种重点实验室,上海市农业科学院生物技术研究中心

2.扬州大学生物科学与技术学院,扬州,225009

关键词： β-葡萄糖苷酸酶;体外分子进化;基因重排;耐高温

会议名称： 中国首届农业生物技术发展论坛

主办单位： 中国科技部

页码： 213-221

摘要： 采用高保真聚合酶从质粒pBI121中扩增出1.8 kb的专一条带,克隆入pBluescript SK载体,测序结果显示与报道一致.该克隆GUS基因被用作对照,再以此为模板,通过DNA重排技术,经DNase Ⅰ降解,Primerless PCR,Primer PCR重新得到大量的突变GUS基因.这些突变的GUS基因构建入原核表达载体pG251中,电击转化大肠杆菌菌株DH5α,构建GUS基因突变体库,经过3轮的重排、筛选得到80℃处理30 min仍显示较高活性的耐高温GUS基因GUS3-3,基因测序显示,GUS3-3与GUS基因之间的同源性为99.2％,核苷酸序列推导的氨基酸序列显示,11个氨基酸发生了突变,80％的突变集中在蛋白的C端.Tm值GUS3-3为80℃,GUS-ck为55℃,提高了25℃,GUS3-3β-葡萄糖苷酸酶热稳定性有了很大的提高,GUS3-3酶的最适温度明显提高.

分类号： Q78

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