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人工合成的耐高温植酸酶基因在毕氏酵母系统中的高效表达

文献类型： 会议论文

第一作者： 彭日荷

作者： 彭日荷 1 ; 熊爱生 1 ; 李贤 1 ; 范惠琴 1 ; 姚泉洪 1 ; 郭美锦 2 ; 张嗣良 2 ;

作者机构： 1.上海市农业科学院生物技术研究中心上海市农业遗传育种重点实验室,上海,201106

2.华东理工大学生物工程学院,上海,200237

关键词： 热稳定植酸酶;基因合成;高效表达;毕氏酵母

会议名称： 中国首届农业生物技术发展论坛

主办单位： 中国科技部

页码： 237-244

摘要： 自然界很难获得大量的耐高温植酸酶.采取连续延伸PCR方法,按照毕氏酵母的偏爱密码,合成1.3 kb烟熏曲霉耐高温植酸酶基因fphy.合成基因与野生型基因核苷酸序列同源性为74％,但编码的氨基酸序列一致.将耐高温植酸酶基因fphy插入毕氏酵母高效表达载体pPIC9中,与分泌信号肽序列融合,通过同源重组将耐高温植酸酶基因整合到酵母染色体中,通过SDS-PAGE检测和表达产物的酶活性筛选,得到重组转化子.证明,植酸酶获得有效分泌和高效表达.经过5 L小罐高密度发酵,蛋白质表达量为5.6 g/L.每毫升发酵液中植酸酶的活力单位达130 000U,表达产物耐高温性很强.90℃处理80 min,仍有40％的活性.

分类号： Q55`Q78

  • 相关文献

[1]应用毕氏酵母高效表达耐高温植酸酶. 彭日荷,熊爱生,李贤,范惠琴,姚泉洪,郭美锦,张嗣良. 2002

[2]透明颤菌血红蛋白(VHb)基因合成及原核生物中的效应. 熊爱生,彭日荷,陈建民,李贤,姚泉洪. 2000

[3]信号肽序列对毕赤酵母表达外源蛋白质的影响. 熊爱生,彭日荷,李贤,范惠琴,姚泉洪,郭美锦,张嗣良. 2003

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