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抗禽流感病毒M2蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

文献类型： 会议论文

第一作者： 李永清

作者： 李永清 1 ; 杨敬 2 ; 张莉 1 ; 韦莉 1 ;

作者机构： 1.北京市农林科学院畜牧兽医研究所,北京 100097

2.军事医学科学院实验动物中心,北京 100071

关键词： 禽流感病毒;单克隆抗体;免疫组化;融合蛋白

会议名称： 2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会

主办单位： 中国畜牧兽医学会;中国微生物学会

页码： 472-476

摘要： 目的：制备抗禽流感病毒M2蛋白的单克隆抗体(mAb)并进行特性鉴定。 方法：利用纯化的融合蛋白GST-M2免疫BALB/c小鼠，然后以GST-M2和GST分别作为ELISA抗原进行筛选，选择GST-M2抗原检测强阳性、GST抗原检测阴性的杂交瘤细胞进行克隆，建立能稳定分泌抗AIV M2 mAb的杂交瘤细胞株。mAb的效价采用间接ELISA和琼脂扩散试验(AGP)测定，用夹心ELISA测定Ig亚类，Western- blot、抗原捕获ELISA、间接免疫荧光及免疫组化染色法检测mAb的特性。 结果：得到4株分泌抗禽流感病毒M2蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株1E1、2F8、4E3和5D6，小鼠腹水中抗体的ELISA效价大于210×100、AGP效价大于1：4。抗体亚类鉴定1E1和4E3为IgG2a，2F8和5G6为IgG2b。抗原捕获ELISA表明，2F8 mAb能与H5、H9亚型AIV发生特异性反应，而不能与鸡新城疫病毒(NDV)和鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)反应。IFA和免疫组化试验表明，2F8 mAb能够与感染了禽流感病毒的MDCK细胞以及鸡体组织细胞发生特异性结合。 结论：本研究获得4株抗禽流感病毒M2蛋白的mAb，其中2F8 mAb的效价高、特异性强，可作为检测AIV方法的核心试剂。

分类号： S852.659.5`Q813.2

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