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猪主要RNA病毒病多重二温式RT-PCR检测方法的建立及初步应用

文献类型: 会议论文

第一作者: 路斌

作者: 路斌 1 ; 袁秀芳 1 ; 徐丽华 1 ; 李军星 1 ; 王一成 1 ;

作者机构: 1.浙江省农业科学院畜牧兽医研究所 浙江杭州 310021

关键词: CSFV;PRRSV;JEV;二重二温式PCR;三重二温式PCR

会议名称: 中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会

主办单位: 中国畜牧兽医学会

页码: 463-468

摘要: 通过对Genbank登录的CSFV.PRRSV和JEV的核苷酸序列进行比对分析,找出CSFV的E2基因,PRRSV的Nsp2基因和JEV的E基因为相对保守区域。利用生物学软件在保守序列分别设计一对引物,目的片断大小分别为CSFV(482bp)、PRRSV(576bp)和JEV(375bp),通过对PCR反应条件的优化,确定了最佳引物浓度、最佳Mg2+浓度和最佳退火温度。将传统三温式PCR过程中的退火与延伸合并为一步,从而大大节省临床检测时间,同时又能通过一个反应体系对CSFV、PRRSV及JEV三种猪主要RNA病毒病进行检测。经验证该方法具有良好的敏感性、特异性和稳定性。因此,该方法对CSFV、PRRSV和JEV的快速准确诊断以及流行病学调查提供技术手段。

分类号: S858.28`S852.659.4

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[1]猪主要RNA病毒病多重二温式RT-PCR检测方法的建立及初步应用. 路斌,王一成,吴润,袁秀芳,徐丽华,李军星,王朝文. 2010

[2]规模猪场4大疫病的血清学检测及免疫抑制病因分析. 徐丽华,王一成,袁秀芳,周继勇,张存,叶伟成,商绍斌. 2009

[3]大肠杆菌LTB增强PRRSV-GP5蛋白免疫反应的研究. 王朝文,吴润,王一成,袁秀芳,徐丽华,李军星,路斌. 2010

[4]公猪繁殖与呼吸综合征研究进展. 云涛,刘光清,倪征,王根荣,梁华丽. 2006

[5]Cloning and Sequence Analysis of ORF5 Gene of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus of the ZJ Strain. Hao, Baocheng,Niu, Dengyuan,Xing, Xiaoyong,Xiang, Haitao,Wen, Fengqin,Fu, Xiaoping,Liang, Jianping,Hu, Yonghao,Niu, Dengyuan,Liang, Jianping. 2014

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