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IBDV抗原表位与HBcAg嵌合基因的分子设计及其表达产物分析

文献类型： 会议论文

第一作者： 刘小娟

作者： 刘小娟 1 ; 王永山 2 ; 欧阳伟 3 ; 张海彬 4 ; 王晓丽 5 ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心,南京 210014 南京 农业大学动物医学院,南京 210095

2.江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心,南京210014

3.江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心,南京 210014

4.南京农业大学动物医学院,南京 210095

5.江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断

关键词： 传染性法氏囊病病毒;乙肝病毒核心抗原;抗原表位;嵌合基因;表达产物

会议名称： 中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展论坛

主办单位： 中国畜牧兽医学会

页码： 785-792

摘要： 为了提高模拟IBDV多表位基因5epis的免疫效力，运用重叠延伸PcR技术，在乙型肝炎病毒核心抗原(Hepatitis B core antigen，HBcAg)基因的23 1位～232位核苷酸(77位～78位氨基酸残基)之间插入BamH I和EcoR I酶切位点，构建HBcAg修饰基因(Modified HBc，mHBc)表达质粒pET-mHBc。然后，将5epis基因定向插入到该表达质粒mHBc基因中，获得嵌合基因mHBc-5epis表达质粒pET-mHBc-5epis，并在大肠杆菌中表达。用sDS-PAGE分析，重组嵌合蛋白的分子量约为29kDa，表达量约占菌体总蛋白的47.6%;在westem-blotting试验中，重组嵌合蛋白与mDV抗体反应形成1条特异性蛋白带。将重组菌超声破碎后，用电镜观察，可见重组嵌合蛋白呈病毒样颗粒(VLP)，直径约60 nm～80 nm;用IBDV抗体夹心ELISA检测，抗原效价达到2.0×102。本研究成功构建了5epis与HBcAg嵌合基因，在大肠杆菌中高效表达了具有IBDV抗原反应性的重组嵌合蛋白并形成了VLP，具有成为颗粒化表位型IBD基因工程疫苗的应用前景。

分类号： S852.65

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