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传染性法氏囊病病毒AH1株vp2基因在昆虫细胞中的表达与应用

文献类型： 会议论文

第一作者： 欧阳伟

作者： 欧阳伟 1 ; 王永山 2 ; 周宇 1 ; 张海彬 3 ; 唐雨德 4 ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心,南京 210014 南京农业大学动物医学院,南京 210095

2.江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心,南京 210014

3.南京农业大学动物医学院,南京 210095

4.南京军区军事医学

关键词： 传染性法氏囊病病毒;vp2基因;基因工程;昆虫细胞;免疫攻毒试验

会议名称： 中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展论坛

主办单位： 中国畜牧兽医学会

页码： 793-801

摘要： 将近期引起IBD免疫预防失败的传染性法氏囊病病毒(IBDV)vp2基因，定向克隆入杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTA中，构建重组供体质粒pFastBacHTA-VP2，转化Escherichia coliDH10Bac感受态，筛选重组杆状病毒表达质粒pBac-VP2。用pBac-VP2转染Sf9昆虫细胞，获得重组杆状病毒vBac-VP2。对重组杆状病毒vBac-VP2感染的Sf9细胞，用间接免疫荧光试验(IFA)检测，具有特异性荧光;用IBDV抗体夹心ELISA检测，呈阳性反应，抗原效价达到1.6×103;用Western blotting分析，在53 kDa处出现一条特异蛋白条带;电镜观察，重组Vp2蛋白能够自组装成病毒样颗粒，在感染细胞中发现了“包涵体样”结构。用HisTrap HP亲和层析柱纯化的重组Vp2蛋白作为包被抗原，建立的IBDV抗体间接ELISA检测方法具有良好的特异性。用重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞裂解物，免疫2周龄SPF鸡，一次免疫14 d后，ELISA检测抗体效价为8×102，中和抗体效价为1106，攻毒实验的存活率为30%;二次免疫14 d后，ELISA抗体效价为3.2×103，中和抗体效价为2536，存活率为100%。在实验观察7 d内，重组Vp2蛋白免疫保护鸡未显任何临床症状和病理变化，法氏囊/体重比高于对照组(P<0.05)。本实验制备的病毒样颗粒重组Vp2蛋白在研制新型IBD基因工程疫苗和检测试剂方面显示出了应用前景。

分类号： S852.65

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