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猪主要DNA病毒多重二温式PCR检测方法的建立及初步应用

文献类型： 会议论文

第一作者： 申世川

作者： 申世川 1 ; 王一成 2 ; 姜平 3 ; 袁秀芳 2 ; 徐丽华 2 ; 李军星 2 ;

作者机构： 1.南京农业大学动物医学院,江苏南京,210095 浙江省农业科学院畜牧兽医研究所,浙江杭州,310021

2.浙江省农业科学院畜牧兽医研究所,浙江杭州,310021

3.南京农业大学动物医学院,江苏南京,210095

关键词： 猪DNA病毒;多重二温式PCR检测;病原体;核苷酸序列

会议名称： 第六届南京农业大学畜牧兽医学术年会——猪禽疫病综合防控研讨会

主办单位： 南京农业大学

页码： 59-62

摘要： 本文通过对GenBank发布的猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病毒(PRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的核苷酸序列进行比对分析,找出PPV的VP2基因,PRV的gH基因和PCV2的ORF2基因的相对保守区域。利用生物学软件在保守序列分别设计高溶解温度引物,将常规三温式PCR过程中的退火与延伸合并为一步,通过对PCR反应条件的优化,确定最佳引物浓度、最佳聚合酶浓度、最佳退火温度以及最佳反应体积,建立了多重二温式PCR方法检测PPV、PRV和PCV2,其扩增的目的片断大小分别为PPV(142 bp)、PRV(300 bp)和PCV2(469 bp),从而节省临床检测时间,同时又能通过一个反应体系对PPV、PRV和PCV2 3种猪主要DNA病毒进行检测。用30份临床病料对本研究多重PCR技术和单项PCR技术进行对比验证,结果显示,两者的总符合率为95%以上。表明建立的多重PCR检测方法,具有高度特异、快速、敏感等特点,可用于对这3种病毒的同时检测和鉴别诊断。

分类号： S858.28:S852.659.2`S854.43

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[3]意大利小麦真菌传棒状病毒与欧洲小麦花叶病毒和土传黑麦花叶病毒属同一种病毒. 杨建平,陈剑平,陈炯,程晔,M.J.Adams. 2000

[4]我国大蒜潜隐病毒的基因组结构及3’端序列的变异. 陈炯,陈剑平,郑红英,杨崇良. 2002

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