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抗人红细胞单链抗体与狂犬病毒G蛋白双功能融合蛋白的构建及检测狂犬病毒G抗体红细胞凝集试验方法的建立

文献类型： 会议论文

第一作者： 周松峰

作者： 周松峰 1 ; 吴健敏 1 ; 廖文军 2 ; 白安斌 1 ; 覃绍敏 1 ; 袁书智 2 ; 林俊 1 ; 袁洁 3 ; 赵武 1 ; 闭炳芬 1 ;

作者机构： 1.广西兽医研究所，南宁 530001

2.北京博莱得利生物技术有限责任公司，北京 100850

3.广东省农业科学院兽医研究所，广东 广州 510640

关键词： 狂犬病毒;G基因;抗人红细胞单链抗体;融合蛋白;抗体检测;红细胞凝集试验

会议名称： 中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议

主办单位： 中国畜牧兽医学会

页码： 342-347

摘要： 为建立一种简便、快速、直观检测狂犬病毒抗体的红细胞凝集试验方法，本研究采用重叠延伸(SOE)PCR法将抗人红细胞H抗原单链抗体基因(2E8ScFv)和狂犬病毒G基因主要抗原表位区(KG基因)拼接成融合基因2E8KG，进而构建原核表达质粒pET-Trx-2E8KG。通过原核表达、纯化、复性获得既能够与人不同血型红细胞结合，又能够与狂犬病毒(RV)高免血清反应的双功能融合蛋白。以此双功能融合蛋白为检测抗原，以人“O”型红细胞作为指示细胞，建立了快速检测狂犬病毒G抗体的方法。通过方阵滴定试验筛选出检测抗原最佳稀释度为1：16，对应的工作浓度为106．26ug／mL，血清最佳稀释度为1：16，作用时间25min。利用该方法检测犬细小病毒(CPV)、犬瘟热病毒(CDV)阳性血清均无凝集，与RV标准阳性血清反应出现强凝集，表明该方法特异性强。用不同批次制备的检测抗原重复检测狂犬病毒阳、阴性血清，检测结果完全一致，具有很好的重复性。将红细胞凝集试验与荧光抗体病毒中和试验(FAVNT)作平行比对，通过对临床1225份犬血清的检测，结果发现血凝价大于或等于1：16(相当于FAVNT试验中和效价0．5IU／ml)为免疫抗体合格;红细胞凝集试验检测结果与FAVNT方法一致性分析的Kappa值为0．78>0．75，检测结果的符合率为88．82％。本研究利用双功能融合蛋白建立的检测犬狂犬病抗体红细胞凝集试验诊断试剂盒，操作简单、结果准确、灵敏度高且特异性强，可以用于犬狂犬病抗体的检测，大面积开展疫苗免疫效果评估，满足了基层快速、简便、可现场使用的要求。

分类号： S852.655

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