文献类型： 会议论文
第一作者： 朱向东
作者： 朱向东 1 ; 王永山 2 ; 王永强 1 ; 潘群兴 3 ;
作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所,农业部兽用生物制品工程技术重点实验室,国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京,210014
2.南京农业大学动物医学院,江苏南京,210095
3.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨,150
关键词： 鸡;传染性法氏囊病;病毒复制;细胞株;基因表达
会议名称： 中国畜牧兽医学会家畜传染病分会第八次全国会员代表大会暨第15次学术研讨会
主办单位： 中国畜牧兽医学会
页码： 829-835
摘要： 为研究microRNA(gga-miR-21)对传染性法氏囊病病毒(IBDV)复制的影响,本研究利用PCR方法从鸡的肝细胞基因组中扩增细胞pri-gga-miR-21,克隆于慢病毒表达质粒pL-EGFP中构建重组质粒pL-miR-21.将pL-miR-21和3个包装质粒pLP1、pLP2和pLP/VSVG共转染293FT细胞,制备含gga-miR-21基因的重组慢病毒VL+miR-21.用VL+miR-21感染DF-1细胞,经杀稻瘟菌素筛选获得了过表达gga-miR-21的细胞株DF-miR-21,用定量RT-PCR(qRT-PCR)检测表明,gga-miR-21的表达量比正常DF-1细胞提高60％。将IBDV接种于DF-miR-21细胞,在96 h后,其病毒滴度(104.75TCID50/0.1mL)显著低于正常DF-1细胞的病毒滴度(108.75TCID50/0.1mL).用生物信息学方法和双荧光素酶报告系统分析验证,在IBDV基因组VP1基因中存在gga-miR-21的结合靶点。将IBDV感染的DFmiR-21细胞,用western blot分析,VP1蛋白的表达量比正常DF-1细胞显著降低;用qRT-PCR分析,VP1 mRNA水平与正常DF-1细胞没有明显差异。本实验结果表明:细胞gga-miR-21可抑制IBDV的复制,其分子作用机理是在VP1基因翻译水平上实现的。
分类号： S858.31:S855.3
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