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牛干扰素α基因的改造与可溶性表达研究

文献类型： 会议论文

第一作者： 缪德年

作者： 缪德年 1 ; 张弦 2 ; 廖学文 2 ; 张克春 1 ;

作者机构： 1.上海市农业科学院,上海201106

2.上海市奶牛研究所,上海200436

关键词： 奶牛;牛干扰素α;基因克隆;可溶性表达;疾病防控

会议名称： 第六届中国奶业大会

主办单位： 中国奶业协会

页码： 228-231

摘要： 干扰素是一种具有广谱抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等功能的细胞因子，能通过多种机制抑制病毒生长，促进免疫细胞活性。牛干扰素α(Bovine interferon-α,BoIFN-α)原始基因在重组大肠杆菌中多以包涵体形式表达,为在大肠杆菌表达系统中获得可溶表达的具有活性的重组BoIFN-α,在不改变干扰素原有氨基酸组成的前提下,根据大肠杆菌密码子偏好性对BoIFN-α基因进行子优化.将优化后的BoIFN-α成熟蛋白基因分别克隆到表达载体pET-28a、PET30a和pCold Ⅱ载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达.优化后的BoIFN-α基因在3种性表达量最载体均获得可溶性表达,但以在载体pCold Ⅱ中获得的可溶高.对重组菌rBoIFN-α-pCold Ⅱ/BL21的表达条件进行优化,在IPTG浓度为0.64mmol/L,诱导温度为15℃,诱导时间为9h的条件下,可溶性目的蛋白的表达量最高,达36mg/L菌液.重组BoIFN-α在MDBK细胞上抗水泡性口炎病毒的活性为1×106U/mg.

分类号： S858.23:S852.21

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