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犬干扰素α4在CHO细胞中的稳定表达

文献类型： 会议论文

第一作者： 王晶宇

作者： 王晶宇 1 ; WANG Jing-yu 2 ; OUYANG Wei 2 ; 欧阳伟 1 ; WANG Yong-shan 2 ; 王永山 3 ;

作者机构： 1.南京农业大学动物医学院,江苏南京210095

2.江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014

3.江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重

关键词： 犬干扰素α4;CHO细胞;真核表达;绿色荧光蛋白;抗病毒作用

会议名称： 第18次全国犬业科技学术研讨会

主办单位： 中国畜牧兽医学会

页码： 00000079-00000088

摘要： 为制备高活性的犬干扰素α4(CaIFN-α4),将犬IFN-α4和绿色荧光蛋白(GFP)基因用2个GGGGS五肽(2G4S)柔性肽连接,获得犬IFN-α4和GFP的融合基因(CaIFN-α4-GFP).将该融合基因与真核表达载体pL-eGFP连接,构建重组表达质粒pL-CαIFN-α4-GFP,并与其它三种慢病毒质粒(pC-Gp,pR-Rev,pC-VsvG)共同转染293FT细胞,包装获得重组慢病毒(vCaIFN-α4-GFP).用获得的重组慢病毒感染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,经杀道瘟菌素筛选、流式细胞仪分选和有限稀释法克隆转染细胞,获得表达CaIFN-α4-GFP的CHO细胞.用荧光显微镜观察构建的CHO细胞呈现荧光,用MDCK与MDBK细胞检测CHO细胞培养上清液具有抗水疱性口炎病毒(VSV)活性,活性分别为1.39×105U/ml和2.19×104U/ml.本研究成功地利用CHO细胞表达了具有活性的犬干扰素α4,为进一步研制高活性的犬IFN-α4生产系统奠定了实验基础.

分类号： S858.292`S859.79

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