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犬干扰素α4在CHO细胞中的稳定表达

文献类型： 会议论文

第一作者： 王晶宇

作者： 王晶宇 1 ; WANG Jing-yu 2 ; OUYANG Wei 2 ; 欧阳伟 1 ; WANG Yong-shan 2 ; 王永山 2 ; XIA Xing-xia 3 ;

作者机构： 1.南京农业大学 动物医学院,江苏 南京210095

2.江苏省农业科学院 兽医研究所 农业部兽用生物制品工程技术重点实验室,江苏 南京210014

3.江苏省农业科学院 兽医研究所 农

关键词： 犬干扰素α4;蛋白表达;水疱性口炎病毒;抗病毒活性

会议名称： 江苏省畜牧兽医学会2017年学术年会

主办单位： 江苏省畜牧兽医学会

页码： 00000215-00000224

摘要： 为制备高活性的犬干扰素α4(CaIFN-α4),将犬IFN-α4和绿色荧光蛋白(GFP)基因用2个GGGGS五肽(2G4S)柔性肽连接,获得犬IFN-α4和GFP的融合基因(CaIFN-α4-GFP).将该融合基因与真核表达载体pLeGFP连接,构建重组表达质粒pLCaIFN-α4-GFP,并与其它三种慢病毒质粒(pC-Gp,pR-Rev,pC-VsvG)共同转染293FT细胞,包装获得重组慢病毒(vCaIFN-α4-GFP).用获得的重组慢病毒感染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,经杀道瘟菌素筛选、流式细胞仪分选和有限稀释法克隆转染细胞,获得表达CaIFN-α4-GFP的CHO细胞.用荧光显微镜观察构建的CHO细胞呈现荧光,用MDCK与MDBK细胞检测CHO细胞培养上清液具有抗水疱性口炎病毒(VSV)活性,活性分别为1.39×105U/ml和2.19×104U/ml.本研究成功地利用CHO细胞表达了具有活性的犬干扰素α4,为进一步研制高活性的犬IFN-α4生产系统奠定了实验基础.

分类号： S859.79

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