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一种植物微茎尖超低温保存和解冻、恢复培养的方法

专利类型： 中国发明申请

专利权人： 上海市农业生物基因中心

发明人： 林田;杨华;龙萍;朱天生;刘灶长;李天菲;罗利军

专利号： CN201310076086.1

摘要： 本发明提供一种以滤纸条为操作载体的植物微茎尖小液滴包埋玻璃化超低温保存、解冻及恢复培养方法，包含步骤有：在解剖镜下剥取无菌苗茎尖，浸入2%~5％无钙离子海藻酸钠溶液中轻蘸，将茎尖排列在无菌滤纸条上，将其浸入0.1%氯化钙溶液中，经10~20min固定，再将带有茎尖的滤纸条放入0.3~0.5mol·L-1蔗糖的MS液体中培养1~3天，置于预处理溶液中处理20-40min转入玻璃化保护剂中处理10~80min，然后将带有茎尖的滤纸条转移到无菌冷冻管中放入液氮中保存。解冻时，将带有茎尖的滤纸条由管中取出放入含1.2mol·L-1蔗糖的MS培养液解冻及洗涤20min将带茎尖的滤纸条放入恢复培养基进行培养，直至生长成植株，本发明方法以滤纸条为操作载体，减少接种器具与植物细嫩茎尖的直接接触，降低机械损伤。

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