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马铃薯病毒RNA的提取方法

专利类型： 中国发明申请

专利权人： 南开大学;天津科润农业科技股份有限公司蔬菜研究所;天津市农业生物技术研究中心

发明人： 杜荣骞;李德森;罗智敏;俞键;祁骥

专利号： CN03130540.7

摘要： 本发明涉及一种马铃薯病毒RNA的提取方法。它包括将马铃薯茎或叶片组织放入冰预冷的灭菌匀浆器或研钵中研磨成匀浆，加入提取缓冲液(Tris-HCl pH8.0 100mmol/L，NaCl 100mmol/L，EDTA 10mmol/L)和β-巯基乙醇，混匀，加入水饱和酚，氯仿/异戊醇，室温离心，水相中加入NaAc(3mol/L，pH5.2)和等体积的异丙醇，-20℃中沉淀3小时；70％的乙醇洗涤沉淀，用无菌双蒸馏水充分溶解等步骤。本发明省去了对器皿的高温烘烤或DEPC处理，实验用蒸馏水亦不需DEPC处理。材料的粉碎只需在冰予冷的器皿中进行。全部提取过程均可在常温下进行。所得到的RNA经RT-PCR检测及序列分析，序列完整，没有降解。该技术可用于生产上大规模的马铃薯病毒RT-PCR检测。

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