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猪繁殖与呼吸综合征流行病学、病原学与分子诊断技术研究

文献类型： 获奖成果

作者：

获奖名称： 科学技术进步奖

获奖等级： 二等奖

关键词： 技术;流行病学;流;猪繁殖与呼吸综合征;技术研究;诊断技术;繁殖与呼吸综合征;病原学;流行;诊断;分子;分子诊断技术;呼吸;病原;分子诊断;综合;猪;研究;繁殖;综合征;流行病

第一完成单位： 福建省农业科学院畜牧兽医研究所

获奖时间： 2015

摘要： 一、课题来源与背景 本项目来源：福建省农业科学院，项目编号为B2009-01。 猪繁殖与呼吸障碍综合征（PRRS）是由PRRSV引起的一种高度传染性疾病，临床上以母猪发热、厌食、早产、流产、木乃伊胎、死胎、弱仔等繁殖障碍及商品猪呼吸道疾病为特征。随着规模化、集约化养猪的发展，猪群疫病日益复杂，并成为养猪业最大风险之一。自2006年5月底开始，全国各地爆发了以变异猪繁殖与呼吸综合征病毒（NSP2 株）为主导因子引起的猪“高热病”疫情，造成了大批猪只的死亡及巨大经济损失，严重阻碍了养猪业健康、持续及高效发展。自从猪繁殖与呼吸综合征病毒被分离鉴定以来，国内外开展了针对该病毒的流行病学、诊断技术和疫苗研究，然而PRRSV在我国是属于近年发生的新疫情，对该病的流行情况、诊断技术和疫苗研究不够够完善，有待深入探讨与研究，尤其在我省对猪繁殖与呼吸综合征病的研究甚少，基本处于起步阶段。因此，在我省开展PRRS研究，制定疫病综合防治措施，对有效防治PRRSV的发生具有重大现实意义和应用前景。 二、技术原理及性能指标 通过流行病学调查，获得了PRRS在我省的流行病学数据；分离到经典PRRS病毒22个毒株，高致病性PRRS病毒7个毒株，对代表性毒株进行了生物学特性、致病性、致病机理及遗传变异分析，探讨了基因序列变化与毒力强弱之间的关系；研究了不同毒力PRRSV的 RNA多态性，获得35条差异条带；开展了高致病性PRRSV和经典PRRSV感染MC-145细胞的差异蛋白比较研究，鉴定了21个差异蛋白，进行了差异蛋白的图谱分析。应用免疫蛋白质组学技术，研究高致病性PRRSV免疫蛋白质组，成功建立了高致病性PRRSV的双向电泳技术，获得具有免疫原性的 6个特异性蛋白；建立了变异型PRRSV的 RT-PCR、Taqman荧光定量RT-PCR及NASBA-ELISA 诊断方法,对PRRSV病原学诊断具有特异性强、敏感性高和重复性好的特点；开展 PRRS综合防控技术研究，分别比对筛选了PRRSV油乳佐剂和IMS1312佐剂灭活疫苗，高致病性PRRSV油乳佐剂灭活疫苗和VE佐剂灭活疫苗的免疫效果，并提出一套PRRSV综合防治措施，在全省范围内进行了示范应用，示范规模猪场1000余个，培训9000余人次，经济社会效益显著。已获授权发明专利1项，已申报发明专利1项，发表科技论文20篇。 三、技术的创造性和先进性 1、分离到2株在NSP2片段存在3处共缺失31个氨基酸的高致病性PRRSV，明确了它们的生物学特性、致病性、致病机理及遗传进化规律。 2、采用DD-RT-PCR技术开展不同毒力PRRSV毒株之间的RNA多态性研究，获得不同毒力PRRSV之间存在35条的RNA差异片段。 3、通过差异蛋白质组学技术，分别比较了高致病性PRRSV感染MC-145细胞、经典PRRSV感染MC-145细胞和高致病性PRRSV与经典PRRSV同时感染MC-145细胞后蛋白表达的差异，成功鉴定出了21个差异蛋白，获得了差异蛋白的功能信息。 4、开展高致病性PRRSV免疫蛋白质组学研究，建立了高致病性PRRSV双向电泳方法，获得6个具有免疫反应的特异性蛋白。 5、建立了变异型PRRSV Taqman荧光定量RT-PCR方法,能检测到264个拷贝数的DNA标准品，0.5623个TCID50的病毒，并构建了变异型PRRSV Taqman荧光定量RT-PCR标准质粒品,组装成了试剂盒。 6、采用IMS1312佐剂研制PRRSV灭活疫苗，并具有一定免疫效果。 成果达到国内领先水平。 五、应用情况及存在问题 成果在全省范围内进行了示范应用，示范规模猪场1000余个，培训9000余人次，共挽回或新增产值约 3.2亿元，经济和社会效益显著。

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