文献类型： 中文期刊

作者： 陈秋勇 ¹ ; 孙志华 ² ; 陈如敬 ¹ ; 吴学敏 ¹ ; 吴仁杰 ¹ ; 丘镜莉 ¹ ; 何冰 ¹ ; 刘玉涛 ¹ ; 王隆柏 ¹ ; 周伦江 ¹ ;

作者机构： 1.福建省农业科学院畜牧兽医研究所

2.福建农林大学动物科学学院

关键词： 猪流行性腹泻病毒;猪氨基肽酶;病毒增殖;非洲绿猴肾细胞

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2025 年 45 卷 002 期

页码： 181-186

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 猪氨肽酶N（porcine aminopeptidase N,pAPN）是一种锌金属蛋白酶，介导病毒与宿主细胞融合，是冠状病毒的细胞受体之一。为探究pAPN对猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）复制的影响，本研究从小肠组织中扩增出pAPN基因全长，通过限制性内切酶同源位点克隆到慢病毒载体中，获得携带pAPN基因的慢病毒载体PLVX-pAPN-mCMV-ZsGreen1-puro,在293T细胞中包装形成表达pAPN的慢病毒，将慢病毒感染Vero细胞，用嘌呤霉素加压筛选阳性细胞，采用有限稀释法筛选出稳定表达的Vero-pAPN细胞系，并通过测定N基因mRNA转录水平、N蛋白表达水平和TCID₅₀水平差异情况来验证该细胞系对PEDV复制的影响。结果显示，本研究构建的慢病毒能够感染Vero细胞，亚克隆筛选到的单克隆细胞株Vero-pAPN（2C5）能够稳定过表达pAPN;该细胞系能够促进PEDV复制，在12～48 h内N基因mRNA转录水平差异显著（P<0.05）、N蛋白表达水平均提高，TCID₅₀在24和48 h差异显著（P<0.05）。本研究构建了Vero-pAPN细胞系，pAPN在Vero细胞中过表达能够促进PEDV复制，该细胞系可作为疫苗高效生产和临床样本分离的候选细胞系。