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猪A群轮状病毒Taq Man荧光定量RT-PCR检测方法的建立与运用

文献类型: 中文期刊

作者: 林青 1 ; 康龙滨 1 ; 吴瑞森 1 ; 赵文娟 1 ; 陈秋勇 1 ; 王隆柏 1 ; 周伦江 2 ; 俞道进 1 ;

作者机构: 1.福建农林大学动物科学学院

2.福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心

关键词: 猪A群轮状病毒;Taq Man探针;荧光定量RT-PCR

期刊名称: 福建农业学报

ISSN: 1008-0384

年卷期: 2025 年 40 卷 004 期

页码: 370-376

摘要: 【目的】建立一种猪A群轮状病毒(porcine rotavirus group A, PoRV A)快速检测方法,用于PoRV检测和流行病学调查。【方法】参考GenBank中猪A群轮状病毒(PoRVA)VP6基因序列(登录号MT025937.1、OP978242.1、PP566178.1)设计特异性引物和探针,优化反应体系中引物和探针的浓度,建立Taq Man RT-qPCR检测方法,并通过特异性、灵敏性和重复性的结果以及临床应用对该方法进行评价。【结果】该方法可特异性扩增PoRV核酸,最低检出限度为27.0 copies·μL-1,灵敏度高于普通RT-PCR 100倍;与猪流行性腹泻病毒(porcine epidemicdiarrheavirus,PEDV)、猪德尔塔冠状病毒(porcinedeltacoronavirus,PDCoV)、猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis of swine, TGEV)核酸均无交叉反应;组内和组间变异系数均小于1.10%,重复性好。151份疑似PoRV的临床样品使用RT-qPCR进行检测,结果显示检出率为42.38%(64/151),优于常规RT-PCR的检出率(33.11%,50/151)。【结论】本研究基于猪A群轮状病毒VP6基因,建立了适用于PoRV A检测及其流行病学调查的Taq Man实时荧光定量PCR检测方法,具有灵敏度高、特异性强、重复性好等优势,为猪轮状病毒检测和流行病学调查提供了技术手段。

  • 相关文献

[1]猪流行性腹泻病毒SYBRⅠ实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立. 修金生,周伦江,陈如敬,王隆柏,陈小权. 2012

[2]水稻缺素胁迫下实时荧光定量RT-PCR的内参基因的选择. 陈玉,郭海萍,谢华安,张建福,王宗华. 2013

[3]变异型猪繁殖与呼吸综合征病毒在人工感染猪体内分布情况. 方桂友,王隆柏,庄向生,邵良平,周伦江,车勇良,魏宏,陈如敬. 2011

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