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猪流行性腹泻病毒荧光RT-RAA检测方法的建立及初步应用

文献类型: 中文期刊

作者: 侯恩慧 1 ; 陈秋勇 2 ; 吴学敏 2 ; 丘镜莉 2 ; 吴仁杰 2 ; 周伦江 2 ; 刘玉涛 2 ; 马玉芳 1 ; 王隆柏 1 ;

作者机构: 1.福建农林大学动物科学学院/福建省兽医中药与动物保健重点实验室

2.福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心

关键词: 猪流行性腹泻病毒;S蛋白;RT-RAA

期刊名称: 福建农业学报

ISSN: 1008-0384

年卷期: 2024 年 39 卷 010 期

页码: 1146-1151

收录情况: CSCD

摘要: 【目的】建立一种快捷、灵敏、简便检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的RT-RAA检测方法,以提高猪流行性腹泻病毒临床检测效率。【方法】针对PEDV S基因片段保守区设计引物和探针,构建标准质粒PEDV-S,通过特异性、敏感性、重复性测定及条件优化,建立检测PEDV重组酶介导链置换核酸扩增荧光法(RT-RAA)。【结果】在42℃恒温作用20 min的条件下,建立的检测方法对检测猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)、伪狂犬病病毒(porcine pseudorabies virus,PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)和猪轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV)等猪源病毒均为阴性,猪流行性腹泻病毒(PEDV)为阳性;最低检出限为4.43×10~2拷贝·μL-1的标准质粒;重复性结果显示,相同浓度标准质粒的差异性很小;利用建立的RT-RAA方法检测40份猪病毒样本,阳性率为7.5%(3/40),与实时荧光定量PCR检测结果相同。【结论】本研究建立的PEDV RT-RAA检测方法具有快速简便、耗时短、特异性高、灵敏度强和重复性好等特点,适用于对PEDV的快速诊断。

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