养殖沉积环境中气单胞菌属细菌的实时荧光定量PCR检测方法的建立

姜娓娓; 李秋芬; 刘淮德; 李晓龙; 《渔业科学进展 》 2014 北大核心 CSCD

摘要：利用GyrB基因的特异性引物建立沉积环境中气单胞菌属细菌的实时荧光定量PCR检测方法。将已知浓度的气单胞菌菌液加入灭菌的沉积物样品中,作为模拟沉积物样品。通过选择和优化沉积物DNA提取方法、特异性引物、标准曲线模板,建立沉积环境中气单胞菌属细菌准确检验的实时荧光定量PCR方法,同时验证该方法的特异性、灵敏性、重复性。结果表明,采用改进的溶菌酶-SDS温和裂解法提取沉积物DNA,以扩增GyrB基因片段的IAF和IAR为特异性引物,并直接以模拟沉积物样品DNA为标准品构建标准曲线,可以建立适用于定量检测沉积环境中气单胞菌属细菌的实时荧光定量PCR方法。该方法可灵敏、特异、准确地定量检测刺参养殖池塘底泥中气单胞菌属中不同种的细菌,检出效率可达103CFU/g。统计分析显示,变异系数为0.21%-0.80%,均小于5%,表明重复性良好。

关键词： GyrB基因 沉积环境 气单胞菌属 实时荧光定量PCR

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半滑舌鳎性别特异微卫星标记的SCAR转化及其应用

刘洋; 陈松林; 高峰涛; 孟亮; 胡乔木; 宋文涛; 邵长伟; 吕为群; 《农业生物技术学报 》 2014 北大核心 CSCD

摘要：半滑舌鳎(Cynoglossus semiliaevis)性别控制与全雌育种相关研究需要一种快速、准确的性别特异分子标记。本研究通过对半滑舌鳎共显性性别特异微卫星标记筛选,得到Z、W染色体同源片段相差35bp的位点,对其进行克隆和测序,针对所得测序结果,重新设计引物进行序列特异扩增区间(sequence characterized amplified region,SCAR)转化,增大35 bp差异片段在扩增片段中的所占比例;并摸索得到4%琼脂糖凝胶,150 V,25 min为最适电泳条件,所得SCAR标记可在雌性个体中扩增出169和134 bp两种DNA条带,雄性个体中扩增出169 bp DNA条带,超雌个体中扩增出134 bp DNA条带;将其应用于生产实践中,对半滑舌鳎生理雄性亲鱼576尾进行快速检测,在保证存活的前提下,剔除了亲鱼中的100尾伪雄鱼,有助于提高后代的雌性比例。本研究所得半滑舌鳎性别特异SCAR标记,可用于实验室对半滑舌鳎雌性、雄性和超雌个体遗传性别的准确测定和养殖场简易环境下养殖亲鱼雄鱼中伪雄个体的快速检测。

关键词： 半滑舌鳎 性别特异标记 序列特异扩增区间(SCAR) 快速检测

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盐酸环丙沙星在导电碳黑糊电极上的伏安行为及其检测应用

刘文文; 张旭志; 郭萌萌; 陈碧鹃; 丁东生; 曲克明; 《化学研究与应用 》 2014 北大核心 CSCD

摘要：本文研究了盐酸环丙沙星(Cipro)在导电碳黑糊电极上的伏安行为,结果表明:B-R缓冲溶液(p H 4.0)中,该药物分子发生2质子、2电子转移的不可逆电化学氧化,过程受吸附控制,电子转移系数α为0.37,表面反应标准速率常数k's为0.95 s-1。实验研究了支持电解质种类、p H值、离子强度、富集电位与时间等对其伏安响应的影响,并据结果对检测条件进行优化,进而建立了Cipro的电化学检测方法。优化条件下,Cipro的氧化峰电流(ipa)与其浓度(C0)在2.5×10-7~6.0×10-5mol·L-1范围内呈良好的线性关系,检测限为9.5×10-8mol·L-1(S/N=3)。将该方法应用于测定淡水渔业水样中痕量Cipro,得到了较满意的结果(平均回收率102.73%)。

关键词： 盐酸环丙沙星 导电碳黑糊电极 伏安法 快速检测 渔业环境监测

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饲料蛋白水平对斑节对虾生长、血液生化指标及体成分的影响

姜松; 杨其彬; 黄建华; 邱丽华; 江世贵; 李晓兰; 《海洋渔业 》 2014 北大核心 CSCD

摘要：研究了蛋白含量为34%、38%和42%的3种饲料对斑节对虾(Penaeus monodon)血液生化指标和体成分组成的影响。实验结果表明,斑节对虾的特定生长率(S GR)在不同的饲料组中均有显著性差异(P<0.05),特定生长率随着饲料蛋白水平的上升而上升;存活率(S R)在各饲料组中差异显著(P<0.05),在38%蛋白水平饲料组中最高。斑节对虾血液中的谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)两种酶的活性和总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)的含量表现出随着蛋白水平的增加而上升的趋势,且在各饲料组中均有显著性差异(P<0.05);血液中葡萄糖(GLUC)的含量也随着饲料蛋白水平的上升而上升,但上升的趋势不明显;血液中甘油三酯(TG)和胆固醇(CHOL)的含量在34%和38%蛋白水平饲料组中趋于一致,在42%蛋白水平饲料组中TG和CHOL的含量均有所上升,CHOL的上升趋势更为明显。随着饲料蛋白水平的增加,斑节对虾全虾蛋白质含量上升;水分含量下降,但下降趋势不明显(P>0.05);灰分和脂肪的含量没有规律性的变化。

关键词： 蛋白水平 斑节对虾 生化指标 体成分

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新型水处理技术在水产养殖中的应用

刘兴国; 《科学养鱼 》 2014 北大核心

摘要：一、当前应用的水产养殖废水处理技术1.物理化学处理法(1)固-液分离技术:固-液分离技术主要是针对养殖废水中悬浮固体去除的废水处理技术,按照悬浮颗粒物的特性(密度、颗粒的大小),又可分为机械过滤和重力分离两种技术。机械过滤是水产养殖系统中用来进行固-液分离的主要手段,通常可去除粒径60~200微米的颗粒物。常用的机械过滤设备有固定筛、旋转筛、振动筛、砂滤器,其中砂滤器是采用填充一定粒径的介质

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尼罗罗非鱼MHC IIB基因多态性及其与链球菌病抗性的关系

高风英; 庞纪彩; 卢迈新; 朱华平; 可小丽; 刘志刚; 《中国农学通报 》 2014 北大核心 CSCD

摘要：为了解MHC IIB基因多态性与尼罗罗非鱼链球菌病抗性的相关关系,本研究用2b-snp-sf和2b-snp-sr引物分别从尼罗罗非鱼40尾感病个体和40尾抗病个体的基因组DNA中扩增MHC IIB基因片段,扩增产物长度为775~797 bp。在775~797 bp核苷酸序列中,抗病群体的多态核苷酸位点有265个(33.2%),感病群体中有255个(31.9%)。在该扩增片段编码的101个氨基酸位点中,抗病群体与感病群体分别有32个和33个多态位点。对80个个体的441个阳性克隆测序,发现有7种不同的MHC IIB等位基因主型,编码7个不同的氨基酸序列。大部分等位基因是两个群体共有的。等位基因Orni-DAB*0201和Orni-DAB*0401在抗病群体中出现的频率(15.5%、5.6%)显著高于在感病群体中出现的频率(7.4%、1.8%),而等位基因Orni-DAB*0501和Orni-DAB*0601只出现在抗病群体。抗病群体中70%的个体出现2~4个等位基因,30%的个体出现1个等位基因;感病群体中42.5%的个体出现2~4个等位基因,57.5%的个体只出现1个等位基因。这提示个体中等位基因数量的多少与其对链球菌病的抵抗力有着明显的关系。个体中具有的MHC IIB等位基因数越多、抗病力越强。本研究结果为抗病尼罗罗非鱼选育奠定了基础。

关键词： 尼罗罗非鱼 主要组织相容性复合体 多态性 链球菌病抗性

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船上液氮速冻技术对金枪鱼保鲜质量的影响

张洪杰; 于刚; 杨少玲; 杨贤庆; 郝淑贤; 岑剑伟; 《广东农业科学 》 2014 北大核心 CSCD

摘要：金枪鱼肉质鲜美,营养丰富,但肉质鲜度下降较快。以黄鳍金枪鱼背部肌肉为研究对象,采用在捕捞船上液氮速冻,再低温冻藏1个月的方法进行处理,并与两种传统的直接低温冻藏处理方式进行对比(-18℃、-55℃),比较冻结过程中温度变化规律的不同以及样品的K值、TBA、挥发性盐基氮、质构、高铁肌红蛋白和色差、菌落总数等鲜度和卫生指标的变化差异。结果表明,液氮能够在2 min内使样品的中心温度迅速降低至-169℃,冻结速度是-18℃冻结方式的百余倍,并且用液氮速冻技术处理后的样品各项指标都优于传统的-18℃直接冻结,说明液氮速冻方法对维持金枪鱼的品质起重要作用。

关键词： 金枪鱼 船载液氮速冻技术 品质

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1株嗜水气单胞菌的拮抗菌鉴定及其特性研究

刘亚楠; 习丙文; 梁利国; 谢骏; 朱健; 《水生态学杂志 》 2014 北大核心

摘要：从池塘养殖的团头鲂(Megalobrama amblycephala)肠道中分离筛选出15株嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)拮抗菌,其中菌株S24在平板贴片试验中对供试的嗜水气单胞菌菌株具有稳定和较高的拮抗作用。综合形态学观察、生理生化指标检测及分子序列(16S rDNA,gyrB)分析,将菌株S24确定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。拮抗菌S24和嗜水气单胞菌(菌株43)的共凝集率为(36.0%±4.3%)。共培养试验可见拮抗菌S24能明显抑制嗜水气单胞菌43的增殖;共培养18 h时,嗜水气单胞菌43的细胞数量达到最低。试验结果表明,拮抗菌株S24适宜作为潜在防治嗜水气单胞菌病的益生菌。

关键词： 嗜水气单胞菌 芽孢杆菌 拮抗

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疑患EMS/AHPNS对虾中检出黄头病毒的一种新株型

刘群; 黄倢; 杨昊霖; 杨冰; 刘笋; 《海洋与湖沼 》 2014 北大核心 CSCD

摘要：对2012—2013年从河北、福建和广东3个对虾养殖场采集的12份发生疑似早期死亡综合征/急性肝胰腺坏死综合征(EMS/AHPNS)的样品,采用组织病理学方法、套式RT-PCR检测方法以及快速灵敏检测试剂盒进行了检测。三地来源的养殖对虾样品症状均表现为肝胰腺颜色变淡,部分出现萎缩,空肠空胃,腹节肌肉略微白浊;组织病理切片结果表明,患病对虾肝胰腺血细胞浸润,肝胰腺盲管上皮细胞脱落,继发性细菌感染,淋巴器官和血淋巴细胞内存在核固缩、破裂和细胞质包涵体。按世界动物卫生组织(OIE)手册的套式RT-PCR方法检测,结果显示,黄头病毒(Yellow head virus,YHV)目的产物的阳性样品检出率为66.7%,该方法对这些样品的灵敏度可能很低。目的产物测序后经NCBI Blast,与已报道的YHV相似性为76.5%—89%;系统发育树显示这3个来源的样品位于同一个分支,与已知的YHV/鳃联病毒(gill-associated virus,GAV)株均不相同,其亲缘关系与YHV较近,而与GAV较远。用新研发的YHV快速高灵敏检测试剂盒检测,结果表明,所有样品均为YHV强阳性。以上表明患AHPNS的养殖对虾中存在一种YHV的新株型的感染,这也是我国首次检测到YHV的感染。

关键词： 早期死亡综合征/急性肝胰腺坏死综合征(EMS/AHPNS) 黄头病毒(yellow-head virus,YHV) 新株型 nested-PCR 组织病理 检测试剂盒

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卵形鲳鲹尾部骨骼胚后发育研究

郑攀龙; 马振华; 郭华阳; 李有宁; 张殿昌; 江世贵; 《南方水产科学 》 2014 北大核心 CSCD

摘要：文章采用阿利新蓝-茜素红双染色法对孵化后第1~第18天卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)仔稚鱼尾骨骨骼发育进行了系统研究。研究表明,孵化后第18天卵形鲳鲹尾部骨骼分化为尾下骨(Hy)、尾上骨(Ep)、尾下骨旁骨(Phy)及尾神经骨(Urn)。孵化后第7天,仔鱼尾部出现第1片尾下骨(Hy1)。孵化后第9天,Hy1与Hy2及Phy在尾部同时出现。孵化后第9~第15天,伴随着Hy3和Hy4的出现,脊索矿化接近尾区,同时脉棘(Mhs)和髓棘(Mns)相继出现。孵化后第15天,3片Ep已经完全分化出来。孵化后第15~第18天,Hy5在尾部分化出来,且各骨片轮廓变清晰。文章探索了卵形鲳鲹胚后发育过程中尾部骨骼发育的特征,为卵形鲳鲹骨骼发育研究奠定了基础。

关键词： 卵形鲳鲹 仔稚鱼 尾骨发育 骨骼染色

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