科研产出
猪链球菌2型粘附相关因子荧光定量PCR检测方法的建立
《江苏农业学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：为了建立定量检测猪链球菌2型(SS2)粘附相关因子mRNA转录水平的荧光定量PCR方法,根据已报导的SS2粘附相关因子甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、分选酶A(SrtA)、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-PGD)及其管家基因aroA,用GenBank登录的核苷酸序列,设计特异性引物,提取SS2总RNA,经RT-PCR扩增和克隆了各粘附相关因子的核苷酸片段,以构建含有各自引物扩增序列的重组质粒,建立检测各粘附相关因子SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法。该方法起始模板数的对数与荧光信号达到所设定荧光阈值所经历的循环数(Ct)之间线性关系好,相关系数均达到0.995以上;扩增产物形成单一的特异性熔解峰;初始模板的检出下限达到了1μl 1.0×102拷贝数;组内变异系数小于2%,说明该方法特异性强、敏感性高、重复性好。
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二化螟Ty3/gypsy反转座子的克隆与序列分析
《中国水稻科学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：转座子是宿主基因组的重要组成部分。Ty3/gypsy反转座子是广泛存在于生物体内的一类反转座子。通过反向PCR(inverse PCR)和基因组步移方法成功地从二化螟体内获得一个具有完整结构的Ty3/gypsy反转座子拷贝,命名为Csu-Ty3(GenBank登录号:KJ191261)。该反转座子拷贝全长4 934bp,在基因组上插入的靶位点(target sit duplications,TSDs)是"AACGT",两端的长末端重复序列(long terminal repeat,LTR)不完全相同,5′端LTR长161bp,3′端LTR长168bp,两者的一致度为93.5%;在靠近3′端LTR处有一段长15bp的嘌呤尾(polypurine tract,PPT)序列。经ORF Finder分析,Csu-Ty3中包含三个独立的ORF,从左至右第一个ORF编码类似病毒的结构蛋白,称为GAG蛋白;第二个ORF编码天冬氨酰蛋白酶(aspartic protease,AP)蛋白;第三个ORF编码一个多聚蛋白,包含反转录酶(reverse transcriptase,RT)、RNA酶H(RNase H,RH)以及整合酶(integrase,IN)。Southern杂交显示二化螟不同地理种群中均有较多的Csu-Ty3拷贝。在特定基因座位上,对Csu-Ty3拷贝插入与否的检测结果显示,二化螟不同地理种群中在该位点上均含有Csu-Ty3拷贝的插入,但在德阳和江津种群中有些个体在该位点上没有检测到Csu-Ty3拷贝的插入。
关键词： 二化螟 反转座子 Ty3/gypsy 克隆 序列分析
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发酵床养猪对土壤重金属含量的影响
《农业环境科学学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：重金属已成为影响土壤健康的限制因素,通过对发酵床垫料、垫料下土壤、发酵床外土壤和传统猪场的土壤样品进行连续定点测定,评价发酵床养殖方式对土壤环境中重金属含量的影响。结果表明,5个月的发酵床养殖,Cu、Zn、Cr、Pb在垫料层0～40 cm累积明显,分别增加了41.23、51.73、13.52 mg·kg-1和5.23 mg·kg-1,垫料下方土壤Cr增加14.30 mg·kg-1,累积量较Cu、Zn、Pb显著升高;传统猪场土壤中的Cu、Zn、Cr较发酵床养殖方式累积更明显,主要集中在20 cm以下的土壤中,分别达22.77、41.83、5.50 mg·kg-1;与传统养殖方式相比,发酵床养殖对周边土壤重金属污染较小。
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新型蒙脱石对仔猪血液生化指标的影响
《江西农业学报 》 2014
摘要：目的:拟探讨新型蒙脱石对仔猪血液生化指标的影响。方法:选取30头健康"杜×大×长"三元杂交断奶仔猪,随机分为5组。分别饲喂基础日粮、基础日粮+1 g/kg新型蒙脱石、基础日粮+3 g/kg新型蒙脱石、基础日粮+5 g/kg新型蒙脱石和基础日粮+3 g/kg微生态制剂。4周后动物前腔静脉采血,检测血液生化指标。结果:与空白对照组相比,新型蒙脱石可以显著上调IgG和IgM水平,提升机体总蛋白含量,降低尿素、总胆固醇和甘油三酯水平。结论:新型蒙脱石具有一定的免疫增强和提升动物生产性能的作用。
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家兔γ干扰素基因的原核表达及其表达产物的单克隆抗体的制备
《中国兽医科学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：将PCR扩增的家兔γ干扰素基因克隆至pET-28a(+)原核表达载体上,构建重组载体pET-28a(+)-IFN-γ。重组载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导、HisTrap亲和柱纯化,获得IFN-γ重组蛋白。以IFN-γ重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞技术获得4株抗IFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别被命名为3H8、4G4、4F10、6C12,它们的亚型分别为IgG1、κ链,IgG2b、κ链,IgG1、κ链,IgG1、κ链。分别制备单克隆抗体腹水,结果,4株单克隆抗体腹水的间接ELISA效价在10-4~10-5之间。本试验通过制备抗家兔IFN-γ单克隆抗体,为研究和检测IFN-γ提供了一种重要的工具。
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响应面法优化复合酶提取芦荟多糖工艺及其抗氧化活性分析
《食品科学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：研究复合酶提取芦荟多糖的工艺,并测定其抗氧化性。在单因素试验的基础上,利用响应面法对复合酶提取芦荟多糖的条件进行了优化,通过测定芦荟多糖的总抗氧化能力、DPPH自由基和羟自由基清除能力研究其抗氧化性。结果显示,当料液比1:30(g/mL)、果胶酶与纤维素酶配比1:3、pH 4.5时,优化最佳提取条件为加酶量0.3%、酶解温度48℃、酶解时间40 min,此条件下芦荟多糖的提取率为5.65%,和超声波辅助法相比提取率提高了4.2%。芦荟多糖具有较好的抗氧化性,随着质量浓度的增加,其总抗氧化能力、DPPH自由基和羟自由基清除能力逐渐增强,在25 mg/mL时其DPPH自由基和羟自由基清除率分别达到75%和90%。复合酶法是一种新的、有效的芦荟多糖提取方法;芦荟多糖具有较好的抗氧化性。
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不同腐熟度鸡粪在蔬菜上施用的农学效应研究
《上海农业学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：采用鸡粪与稻壳为原料进行堆肥试验,研究了鸡粪堆腐进程中温度、pH、电导率(EC)、C、N、P等动态变化规律及不同堆腐时间(15 d、25 d、35 d、50 d)堆肥对小白菜、黄瓜的农学效应。结果表明:随着堆腐时间的延长,鸡粪堆肥的腐熟程度不断提高,堆腐50 d时达到基本腐熟。小白菜田间单位面积出苗数随堆腐时间延长而提高,但处理间未达显著差异(P>0.05);不同堆腐程度鸡粪堆肥对移栽黄瓜成活率、小白菜与黄瓜单株地上地下部分生物量、株高、根长、叶片叶绿素SPAD值均无不良影响。腐熟度理化指标与蔬菜生物指标的相关关系分析表明,堆肥理化指标间、理化指标与发芽指数间的相关关系密切,但堆肥腐熟度理化指标与蔬菜田间生物指标间关系不密切。不同腐熟程度鸡粪堆肥对蔬菜播种出苗与成苗的影响不一,低腐熟度鸡粪对蔬菜播种出苗可能产生影响,对移栽苗影响不明显。
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