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基因编辑外源基因Cas9定性定量检测方法的研究

农业生物技术学报 2022 北大核心 CSCD

摘要:对基因编辑产品进行有效监管、消除公众疑虑是基因编辑产品在我国产业化的前提.目前,Cas9核酸内切酶是基因编辑技术中最常用的手段,因此需要建立针对Cas9核酸内切酶的定性定量检测方法.本研究以基因编辑中最常用的Cas9核酸内切酶外源序列为靶位点,设计和筛选引物、探针,进行PCR体系优化,确定最佳的引物浓度与退火温度,通过特异性、灵敏性等测试建立了检测基因编辑外源基因Cas9的普通PCR和qPCR检测方法.在检测方法特异性实验中,普通PCR和qPCR方法均只在含有Cas9等外源DNA的样品中扩增出了阳性结果,而其他不含有Cas9核酸内切酶的样品则均为阴性结果;在方法灵敏性测试中,普通PCR检测方法的检出限为0.1%,qPCR法检测下限(limit of detection,LOD)为16个拷贝;在方法稳定性实验中,普通PCR和qPCR方法在其相应最低检出限浓度下分别进行了67与60次重复实验,结果均为阳性.该定性定量方法适用于不同基因编辑作物,如水稻(Oryza sativa)、大豆(Glycine max)和油菜(Brassica napus)等.本研究建立的Cas9定性及定量检测方法特异性良好、灵敏度较高、稳定性较强.该方法的建立为将来实现对基因编辑产品的有效监测提供了一定的技术支撑.

关键词: 基因编辑技术 常规PCR qPCR Cas9

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基于转录组测序的饲料添加淫羊藿对番鸭睾丸组织差异表达基因分析

中国畜牧杂志 2022 北大核心

摘要:为研究饲料添加淫羊藿的番鸭睾丸组织相关基因和调控通路变化,本研究将60只公番鸭随机分为2组,每组3个重复,一组饲喂基础日粮(对照组),另一组饲喂基础日粮的基础上添加量为1%的淫羊藿(实验组).饲喂75 d结束后,测定血清生殖激素和抗氧化指标,并进行睾丸组织形态学观察和高通量转录组测序.结果显示,实验组生精上皮层数多,生精细胞数量多,管腔饱满,成熟精子多.实验组血清生殖激素中睾酮含量、雌二醇含量、促卵泡素含量和促黄体素含量均显著高于对照组,实验组血清抗氧化指标中超氧化物歧化酶含量、谷胱甘肽过氧化物酶含量、总抗氧化水平均显著高于对照组,丙二醛含量显著低于对照组.通过转录组测序分析,本研究最终得到2414个差异表达基因,这些差异表达基因主要被注释到白细胞激活、受体等过程,主要富集于细胞因子受体相互作用、铁死亡等代谢途径和信号通路.本文研究表明饲料添加淫羊藿激活了番鸭睾丸相关基因或通路表达,对番鸭繁殖力的提高具有重要意义.

关键词: 番鸭 睾丸组织 转录组测序 差异表达基因

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黄肉中华猕猴桃新品种'金义'

园艺学报 2022 北大核心 CSCD

摘要:‘金义’是从中华猕猴桃自然杂交后代中选育出的四倍体黄肉猕猴桃新品种。在浙江金华地区果实采收期为10月上旬。果实圆柱形,平均单果质量110 g,软熟时果肉黄色,高甜,味浓,可溶性固形物含量15.6%~22.1%,总糖含量11.8%~13.6%,总酸含量(以柠檬酸计)12.32~15.26 g·kg-1,维生素C含量1.28~1.56 mg·g-1FW。树体较抗溃疡病。丰产稳产,嫁接苗第4年平均产量15 300 kg·hm-2

关键词: 猕猴桃 中华猕猴桃 黄肉 品种

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水稻病虫害绿色防控技术标准体系的研究与建设

中国标准化 2022

摘要:病虫害绿色防控是当前农业绿色发展的关键技术,技术标准是先进成果转化应用的重要载体.本文围绕水稻病虫害绿色防控,探讨了在当前农业生产技术条件下,通过科学研究、成果转化、示范应用等建立绿色防控标准体系的方法.该标准体系建设可为当前开展水稻以及其他农作物病虫害绿色防控提供参考借鉴.

关键词: 水稻 绿色防控 标准体系

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一种新型调平机构的运动学分析

中国设备工程 2022

摘要:为了将并联机构应用于车载调平领域,提出一种新型5-DOF自动调平机构。首先介绍了调平机构的整体结构及调平原理,然后根据矢量法建立了机构的运动学模型,推导了位置反解和雅克比矩阵,最后基于位置反解与雅克比矩阵利用数值仿真软件分析了机构的运动性能,验证了调平模型的正确性。研究结果表明此机构运动灵活性好,能满足车载调平的工作要求。

关键词: 位姿调平 并联机构 运动学

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减量施肥对汤浦水库香榧地氮磷流失负荷的削减效果

浙江农业科学 2022

摘要:汤浦水库作为虞绍平原最大的水库,其水质的好坏对百姓的生活用水安全至关重要,近些年水库水质随着香榧种植面积的剧增而呈现不稳定的现象,香榧地氮磷流失状况亟待查明.本研究选取坡度和树龄较为一致的香榧种植区作为研究对象,通过径流场观测的方法,研究了不同施肥量对土壤氮磷流失负荷的削减效果,结果表明,减量施肥方案实施后,总氮与总磷径流流失负荷分别为13.64与1.19 kg·hm-2,分别较常规施肥处理的17.41与1.48 kg·hm-2削减了21.7%与19.8%.可见,通过源头施肥减量可有效削减香榧地的氮磷流失负荷,对于保障汤浦水库水质持续达标具有重要作用.

关键词: 汤浦水库 香榧 土地利用 施肥减量 氮磷流失负荷

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长期施用有机肥对稻田土壤理化性状的影响

浙江农业科学 2022

摘要:利用长期定位小区试验(6年),探究不同用量有机肥配施化肥对水稻-油菜轮作土壤质量的影响,为水旱轮作种植条件下化肥减量,培育健康土壤提供科学合理的施肥方案和理论依据.试验设置不施肥(CK)、单施化肥(CF)、 三种不同施用量有机肥处理(M1、M2、M3分别施用有机肥2250、4500、9000 kg·hm-2),共5个处理,各施肥处理氮养分含量相同.结果表明,与CF相比,长期施用有机肥能显著提高土壤总孔隙度,降低土壤容重,对土壤田间持水量影响不明显;M3处理提高土壤pH 0.36个单位;各有机肥处理均能显著提高土壤中有机质、 全氮、 全磷含量,M2、M3处理土壤有效磷、 速效钾含量显著高于CF、M1处理,M3处理土壤碱解氮含量显著高于CF、M1和M2,施用有机肥不能提高土壤全钾含量;土壤有效磷和速效钾含量对有机肥施用量响应更为敏感,均随着施用量的增加而显著提高.等氮用量下,长期施用有机肥能改善稻田土壤物理性状,提升土壤氮磷钾养分供应状况.在稻油水旱轮作模式下,结合秸秆还田,每季有机肥施用量要高于或等于4500 kg·hm-2时才有较好的培肥效果,9000 kg·hm-2的有机肥施用量效果最佳,氮肥替代量可达32%~64%.

关键词: 有机肥 水稻土 土壤物理性状 土壤养分

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皱环球盖菇不同极性萃取物抗氧化活性比较及成分分析

菌物学报 2022 北大核心 CSCD

摘要:为考察皱环球盖菇子实体的抗氧化活性,利用溶剂萃取法得到皱环球盖菇子实体二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇和水4种不同极性萃取物,选用二苯基三硝基苯肼自由基(DPPH)法、羟基自由基法和还原力法对4种萃取物进行体外抗氧化活性分析。结果表明,乙酸乙酯萃取物显示了最强的抗氧化活性;通过超高效液相色谱串联三重四级杆飞行时间质谱法(UPLC-Triple-TOF/MS)分析了皱环球盖菇乙酸乙酯萃取物中化学组成,从中鉴定出9种化合物,多数为核苷类物质,具有很好的抗氧化活性。研究结果为皱环球盖菇的开发提供了理论依据和技术支持。

关键词: 皱环球盖菇 不同极性提取物 抗氧化活性 核苷类物质 超高效液相色谱串联三重四级杆飞行时间质谱分析

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干旱胁迫对三角梅生长及生理生化的影响

浙江农业科学 2022

摘要:为研究干旱条件下三角梅的生长及生理生化响应,以一年生长势一致、 健康无病虫害的'同安红'三角梅为试验材料,采用自然干旱法,测定其在自然干旱条件下的地径、 叶片含水量、 光合参数、 过氧化氢(H2O2)含量,超氧自由基(O·2-)产生速率及超氧化物歧化酶(SOD)、 过氧化氢酶(CAT)、 过氧化物酶(POD)和抗坏血酸过氧化物酶(APX)的活性.结果表明,随着干旱程度的增加,三角梅的地径增量、 叶片含水量、 净光合速率(Pn)、 气孔导度(Gs)和蒸腾系数(Tr)不断降低,至停水35 d时,下降至最低;而H2O2含量、O·2-产生速率及SOD、CAT和APX含量则呈持续增加的趋势,在停水21 d(轻度)、28 d(中度)、35 d(重度)时,相比对照差异显著.因此,三角梅可以抵抗轻微程度的干旱,而在重度干旱条件下生长受到抑制.

关键词: 三角梅 干旱 生长 光合参数 抗氧化酶

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益生菌制剂对雏鸭血清抗氧化能力、免疫功能和肝功能的影响

现代农业科技 2022

摘要:为探究益生菌制剂对雏鸭血清抗氧化能力、免疫功能和肝功能的影响,选取1日龄体质量相近、健康状态良好的雏鸭600只,将其随机分成2组:对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中添加0.15%益生菌制剂,试验期28 d.结果表明:与对照组相比,试验组雏鸭试验期末体质量和ADG均显著提高(P<0.05),血清中T-AOC、GSH-Px活性显著提高(P<0.05),血清IgA、ALB、TNF-α、IL-2含量显著提高(P<0.05).由此可见,在雏鸭饲料中添加益生菌制剂可以提高其生长性能、血清抗氧化能力,并对雏鸭的免疫功能和肝功能有积极作用.

关键词: 益生菌 雏鸭 抗氧化 免疫功能 肝功能

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