科研产出
视黄酸诱导鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化的研究
《中国畜牧兽医 》 2020 北大核心
摘要:体外胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)向生殖细胞分化可用于治疗不育症,同时也为揭示种系世代的分子机制提供最佳模型.试验旨在探讨视黄酸(retinoic acid,RA)诱导鸡胚胎干细胞(chicken embryonic stem cells,cESCs)向雄性生殖细胞(male germ cells,MGCs)分化的作用效果.利用胰蛋白酶消化法从新鲜种蛋X期鸡胚中分离胚胎干细胞,以鸡胚成纤维(chicken embryo fibroblast,CEF)细胞为滋养层,进行体外培养,利用形态法、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)染色和胚胎阶段特异性表面抗原(embryo specific surface antigen 1,SSEA-1)检测对获得的胚胎干细胞进行鉴定.结果表明,获得典型的呈巢状或岛状的cESCs克隆,细胞AKP染色呈蓝紫色,表明其具有较高的内源性AKP活性;SSEA-1鉴定结果呈阳性,显示cESCs克隆具有多能性.采用10-5 mol/L RA诱导鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化,镜下观察细胞形态变化,分别于诱导第0、2、4、6、8、10天提取细胞总RNA,反转录成cDNA,用于实时荧光定量PCR检测生殖细胞标志基因的表达.结果表明,在此诱导过程中,作为胚胎干细胞标志基因Nanog、Sox2表达量持续显著下降,而生殖细胞特异性基因Dazl、Stra8、c-kit、integrinα6表达量呈持续上升趋势;免疫细胞化学检测可观察到特异基因相关蛋白的阳性克隆.本研究成功分离出cESCs,可体外培养并保持未分化状态及多能性.10-5 mol/L RA能够促进cESCs向雄性生殖细胞方向分化,可以引起生殖细胞相应基因的表达,为进一步研究雄性生殖细胞的形成和调控机制提供参考.
关键词: 鸡胚胎干细胞 雄性生殖细胞 体外培养 性别鉴定 视黄酸(RA) 诱导分化
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ICP-MS法测定富硒木耳硒含量结果的不确定度评估
《农产品质量与安全 》 2020
摘要:以电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)测定富硒木耳中的硒含量,对其测量结果进行了不确定度评估.根据GB 5009.268-2016《食品安全国家标准食品中多元素的测定》方法,分析探讨了影响测量结果不确定度的来源因素,依据JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》对各不确定度分量进行合成并扩展,并通过公式计算测量结果的扩展不确定度.评估结果明确了标准曲线配制是产生测量结果不确定度的主要因素,重复性、 拟合曲线和仪器校准有一定的不确定度引入,试样制备引入的不确定度可以忽略不计.当包含因子k=2时,测量结果的扩展不确定度为0.43 mg/kg,样品的测量结果表示为(8.48±0.43)mg/kg,同时与原子荧光法测定硒的不确定度评定予以比较.
关键词: 电感耦合等离子体质谱法 富硒木耳 硒 不确定度评估
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不同品种猪PBD-119基因的克隆与差异表达研究
《延边大学农学学报 》 2020
摘要:为获得猪β防御素-119(PBD-119)基因mRNA序列以及在不同品种猪体内组织表达量模式,该试验以民猪、大白猪和野杂猪为试验动物,采用RT-PCR方法扩增PBD-119基因mRNA并进行生物信息学分析,利用qRT-PCR的方法检测该基因在不同品种猪组织中的差异表达情况.RT-PCR扩增结果表明:在3个群体猪3种类型组织(肝脏,脾脏和血液)中均能扩增出特异性片段,测序结果显示片段长度为408bp,通过对PBD-119基因序列的比对分析,该基因在第263位碱基上存在多肽位点的改变(C263T),并在第53氨基酸位点发生改变,由脯氨酸变为丝氨酸(P-S),但并不影响二硫键结构;进化树分析表明,猪与人、倭黑猩猩和马的亲缘关系较近,与羊驼和双峰驼亲缘关系较远.qRT-PCR结果显示,PBD-119基因在3个品种猪的各组织中均有表达,且表达存在差异,以品种为研究对象比较相同组织的差异表达,PBD-119基因在肝脏中的表达为野杂猪>民猪>大白猪,在脾脏中表达为大白猪>民猪>野杂猪,而在血液中的表达为民猪>野杂猪>大白猪;以相同品种为目标,考察不同组织间PBD-119基因差异表达,结果发现大白猪不同于民猪和野杂猪在肝脏、脾脏和血液中的表达,表现为脾脏最高,其次为肝脏、血液,而民猪和野杂猪的表达为肝脏和血液中较高,脾脏最低.该试验结果为进一步探究PBD-119基因的生物学功能及免疫防御相关的候选基因提供基础依据.
关键词: 民猪 大白猪 野杂猪 PBD-119基因 克隆 差异表达
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