科研产出
UPLC-MS/MS法测定22种农产品中杀螺胺乙醇胺盐残留
《分析测试学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：建立了超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)测定22种农产品中杀螺胺乙醇胺盐残留的分析方法.样品采用改进的QuEChERS方法进行前处理,使用1%甲酸乙腈提取,利用弗罗里硅土进行净化,采用C18色谱柱进行分离,电喷雾离子源负电离方式和多反应监测模式检测,基质外标法定量.结果表明,22种农产品基质中杀螺胺乙醇胺盐在0.005~0.10 μg/mL范围内均呈现良好的线性关系;在茶叶中的检出限为0.003 mg/kg,定量下限为0.01 mg/kg,在其它基质中的检出限为0.002 mg/kg,定量下限均为0.005 mg/kg.在低、中、高3个加标水平下,平均回收率为77.3%~115%,相对标准偏差(RSD)小于10%,符合残留分析方法要求.该方法简单快速,试剂消耗较小,可满足农产品中杀螺胺乙醇胺盐的检测需求.
关键词： UPLC-MS/MS QuEChERS 杀螺胺乙醇胺盐 残留 农产品
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广藿香内生真菌Fusarium falciforme R16次生代谢产物及其抗菌活性
《分子植物育种 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：广藿香是具有广泛应用价值的重要南药，为了探究其内生真菌的代谢属性及其抗菌作用，本研究采用组织培养法从广藿香植物花组织中分离和鉴定内生真菌，采用硅胶柱和半制备高效液相色谱等多种柱色谱分离方法对广藿香内生真菌Fusarium falciforme R16的次生代谢产物进行分离纯化，运用NMR和MS等波谱方法鉴定化合物结构，对单体化合物进行抗菌活性测试。结果从内生真菌Fusarium falciforme R16发酵产物中分离得到12个化合物，分别鉴定为对羟基苯乙醇（1）、2-羟乙基-联二苯（2）、4-甲基-5,6-2H-吡喃-2-酮（3）、苯乙酸乙酯（4）、苯甲醚（5）、4-bromostilbene-O-methyl isopropionate （6）、2-甲基-1,4-苯二酚（7）、N-（4-羟苯乙基）-2-苯乙酰胺（8）、乙酸-4-戊烯酯（9）、2-（4-甲氧基苯）-2-丙醇（10）、4-methylideneoxane （11）和2-四氢萘酚（12）。抗菌活性结果显示化合物5,7和10对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌具有一定抑制活性，化合物11和12对金黄色葡萄球菌具有弱的抑制活性，本研究结果为真菌抗菌活性物质发掘提供参考依据。
关键词： 广藿香 内生真菌 次级代谢产物 抗金黄色葡萄球菌活性 抗枯草芽孢杆菌活性
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7种不同果型草果果粉的理化指标及挥发性成分分析
《热带作物学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：为了探究不同果型草果果粉的理化指标及其挥发性成分的差异,以怒江州泸水市草果果粉为原料,探究不同果型草果果粉的色差、挥发油含量、含水量、粒径、表面微观结构等理化指标,并采用顶空固相微萃取和气相色谱-质谱联用技术分析草果果粉的挥发性成分.结果表明:7 种不同果型草果果粉的色差值△E为(19.17±0.29)~(25.15±0.17),L*值在(72.50±0.23)~(76.87±0.07)范围内,a*值为(5.17±0.05)~(6.97±0.15),b*值为(12.35±0.43)~(16.91±0.43);挥发油含量为(0.76±0.01)~(1.30±0.26)mL/100 g;含水量为(11.13%±0.12%)~(15.05%±0.23%);粒径方面NL5、NL6 草果果粉粉体颗粒差异最大.7 种不同果型草果果粉中共检测出 31 种挥发性成分,共有成分 17 种,主要为醛类和醇类物质,包括反-2-癸烯醛、桉叶油醇、柠檬醛、香叶醇、乙酸香叶酯等.其中 NL2 草果果粉检出的挥发性成分最多,共 28 种,且反-2-癸烯醛相对含量最高,为 22.24%±2.29%,NL5 草果果粉中桉叶油醇的相对含量最高,为 17.52%±2.16%.因此,不同果型草果果粉在色差、挥发油含量、含水量、粒径、表面微观结构上均存在一定差异,不同果型草果果粉的挥发性成分既有共性特征又有差异性.该研究结果可为优质纯天然草果果粉的生产及应用提供理论指导.
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椰枣幼苗地上部和根部显微结构观察和植物激素相关差异基因分析
《分子植物育种 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：椰枣是干旱和半干旱地区重要的木本粮食作物之一，其地上部和根部形态显微结构差异明显，然而内在的差异转录机制不清楚。为探明椰枣幼苗地上部和根部差异机制，本研究对椰枣幼苗的地上部和根部进行转录组测序，重点分析植物激素信号转导通路的生长素、细胞分裂素、脱落酸、赤霉素、水杨酸和茉莉素相关基因。结果表明，地上部和根部形态与显微结构差异明显，叶片具有圆球形的叶肉细胞，茎中有较为密集的细胞核，根的中间为中柱。转录组分析发现，共有7 101个差异表达基因，上调3 042个，下调4 059个。差异表达基因的KEGG通路分析结果显示，前5条通路中的第2条途径为植物激素信号转导合成途径。地上部生长素TIR1，赤霉素GID1、DELLA、TF，水杨酸NPR1、PR-1基因高表达；而根部生长素AUX1、PIN，细胞分裂素AHP、B-ARR、A-ARR、BIN3，水杨酸TGA，茉莉素JAZ，脱落酸PP2C、ABF、SnRK2基因高表达。椰枣幼苗的地上部和根部的植物激素相关基因具有组织表达特异性，参与调控椰枣幼苗的发育机制不同，为后续外源激素调控椰枣幼苗地上部和根的生长发育提供基础。
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有机肥氮部分替代化肥氮对间作珠芽魔芋生长及养分积累利用的影响
《中国土壤与肥料 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：为探索胶园间作珠芽魔芋的合理施氮方法，对有机肥氮部分替代化肥氮对珠芽魔芋生理特性、产量、品质及养分积累利用的影响进行了研究。研究设6个处理，分别为不施氮对照（T1）、当地习惯化肥氮用量（N 450kg/hm~2)(T2）、80%习惯化肥氮用量+20%有机肥氮用量（T3）、80%习惯化肥氮用量（T4）、60%习惯化肥氮用量+20%有机肥氮用量（T5）、30%习惯化肥氮用量+50%有机肥氮用量（T6）。成熟期测定珠芽魔芋叶片形态指标、叶面球茎数量及倒伏株数、地下球茎产量、可溶性糖、淀粉、葡甘聚糖含量、氮磷钾含量及氮肥利用率。结果表明：与纯施化肥氮相比，有机肥代替部分化肥珠芽魔芋株高、茎粗、叶面球茎数量、繁殖系数增加，抗倒伏能力增强，提高了地下球茎氮肥利用率、产量、单株鲜重、膨大系数及氮、磷、钾吸收量。胶园间作珠芽魔芋的合理施氮模式为80%化肥氮+20%有机肥氮或者30%化肥氮+50%有机肥氮。
关键词： 胶园间作 有机肥氮替代部分无机肥氮 生理特性 产量 养分吸收
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巴西橡胶树大、小橡胶粒子在乙烯调控天然橡胶合成中的作用分析
《热带作物学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：巴西橡胶树（Hevea brasiliensis）是重要的产胶植物，胶乳中的橡胶粒子（RP）是合成天然橡胶的重要细胞器，但其响应外源乙烯刺激调控天然橡胶合成的具体机制还不清楚。为了明确不同大小RP在此过程中的作用，本研究通过分离外源乙烯刺激后胶乳中不同直径的RP，并与对照组进行差异蛋白质组学分析。结果发现：在直径较大的大橡胶粒子（LRP）中鉴定出响应乙烯刺激差异蛋白37个，分别参与天然橡胶合成、糖酵解/糖异生、碳代谢及氨基酸生物合成等代谢通路，其中包含4个REF/SRPP家族成员；在直径较小的小橡胶粒子（SRP）中鉴定出56个差异蛋白，分别参与内质网中的蛋白质加工、内吞及剪接体等代谢通路，其中包含5个REF/SRPP家族成员。关键差异蛋白REF138具有较多等电点（pI）和分子量不同的蛋白亚型，LRP中低于标准等电点（4.80）的REF138亚型响应乙烯刺激积累减少，高于标准等电点的REF138亚型响应乙烯刺激积累增加；与LRP不同，SRP上有更多的REF138亚型响应乙烯刺激发生变化，具有标准分子量（14.7 kDa）的REF138亚型响应乙烯刺激积累增加，高于标准分子量的亚型响应乙烯刺激积累减少。针对关键差异蛋白的互作蛋白功能分析发现，REF/SRPP家族成员REF138、REF175、REF258、SRPP117及SRPP204间存在相互作用，可能形成蛋白复合体结合在RP上。除REF/SRPP家族成员外，REF138的互作蛋白主要参与剪接体及内吞代谢通路，REF258的互作蛋白主要参与脂代谢过程与次生代谢产物合成调控。综上，通过对LRP及SRP上响应乙烯刺激差异蛋白及其互作蛋白的功能分析初步揭示了LRP和SRP响应外源乙烯刺激调控天然橡胶合成的代谢调控机制。
关键词： 巴西橡胶树 橡胶粒子 乙烯 天然橡胶合成调控 蛋白互作
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木薯MeMLO12基因克隆及其CRISPR-Cas9表达载体的构建
《热带作物学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：MLO基因是植物中特有的一类抗病性负调控因子，该基因突变导致植物产生广谱抗病性。本研究从木薯全基因组中克隆获得木薯MLO12基因的DNA和cDNA序列，并将其命名为MeMLO12。该基因全长3743 nt、编码区（ORF）全长1728 nt，具有一个完整的开放阅读框，含有15个外显子和14个内含子，编码586个氨基酸，蛋白的分子质量为67.2 kDa，等电点为8.85。该基因编码的蛋白定位在内质网膜上，无信号肽，在23～45、74～96、161～183、285～307、312～334、371～393、413～435 aa处形成7次跨膜结构域。qRT-PCR定量分析发现，受木薯黄单胞病菌侵染后，MeMLO12基因在木薯抗、感品种中的表达量存在明显的差异，参与木薯与黄单胞菌之间的互作，表现出负调控作用。选择该基因第11个外显子进行Snap Gene Viewer分析，获得了10 455条sgRNA的种子序列，从中选取3条靶序列约23 nt，碱基组成上3'末端含G结尾，将其构建到CRISPR-Cas9载体上，经验证，确认MeMLO12的3条靶序列已经成功构建到基因编辑载体上，将其命名为pSGR-Cas9-AT-MeMLO12载体。
关键词： 木薯 MeMLO12基因 克隆 表达分析 CRISPR-Cas9载体 构建
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香蕉枯萎病菌内源报告基因Foc4carS的鉴定及其应用
《热带作物学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：香蕉枯萎病是由尖孢镰刀菌古巴转化型（Fusarium oxysporum f. sp. cubense, Foc）引起的香蕉毁灭性土传病害，其中4号生理小种（Foc4）能感染几乎所有的香蕉品系，危害最严重。carS基因通过调控下游car结构基因参与调控镰刀菌类胡萝卜素的生物合成，本研究克隆鉴定了Foc4carS基因（FOIG＿05085）,Foc4carS蛋白具有典型的RING-finger蛋白结构域。利用分割标记法（Split-marker PCR）获得Foc4carS基因的融合片段，同时构建含有Foc4carS基因sgRNA591序列的pUC-fFuCas9-HTBNLS-hph-Foc4carS基因编辑载体，通过PEG介导的原生质体转化获得该基因的敲除突变体、回补突变体以及基因编辑敲除体，并对敲除和回补突变体的生物学特性和致病力进行分析。结果显示：ΔFoc4carS突变体的菌落直径、产孢量和致病力等生物学表型与野生菌株Foc4无显著差异，而ΔFoc4carS突变体菌落颜色呈深橙色，Foc4carS基因的缺失影响了次生代谢产物类胡萝卜素的生物合成；基因编辑的ΔFoc4carS（HDR）突变体不论是再生筛选板还是继代后的PDA平板，其菌落均出现典型的深橙色，表明Foc4carS可作为内源报告基因，在香蕉枯萎菌Foc4中进行基因质粒型CRISPR/Cas9编辑可行。
关键词： 香蕉枯萎菌Foc4 Foc4carS基因 类胡萝卜素 基因敲除 CRISPR/Cas9基因编辑
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海洋真菌Phaeosphaeriopsis sp.ZYX-Z-811次生代谢产物研究
《热带海洋学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：对海洋真菌 Phaeosphaeriopsis sp.ZYX-Z-811 发酵液中次生代谢产物进行分离鉴定,并评价其生物活性.采用正相硅胶柱色谱、反向C18柱色谱、高效液相色谱、SephadexLH-20凝胶柱色谱等技术进行分离纯化,共分离得到 10个化合物,利用核磁及红外和紫外波谱技术对分离的单体化合物进行结构鉴定,分别为 4-epi-lignicol(1)、lignicol(2)、6-demethylkigelin(3)、6,8-dihydroxy-3,4,7-trimethylisocoumarin(4)、6,7-dimethoxymellein(5)、musaone A(6)、2-(4-hydroxyphenyl)ethylacetate(7)、3-吲哚甲醛(8)、吲哚-3-乙酸甲酯(9)、对羟基苯甲酸甲酯(10),其中化合物 1 为未发表的化合物,文章通过电子圆二色谱(electrostatic circular dichroism,ECD)计算确定了其绝对构型.对这些化合物分别进行抗氧化和α-糖苷酶抑制活性评价,发现化合物 10有弱的抗氧化活性.
关键词： 海洋真菌 Phaeosphaeriopsis sp. 次生代谢产物 生物活性
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木薯花叶病毒AC4蛋白与AtPARN互作研究
《热带作物学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：木薯(Manihot esculenta Crantz)作为重要的热带作物,是全球六大粮食作物之一,并为全球近七亿人口提供主粮,然而病毒侵染引起的病害在全球范围内严重威胁木薯产业的发展.木薯花叶病毒病(cassava mosaic disease,CMD)是最有威胁的病害之一,造成严重的经济损失.斯里兰卡木薯花叶病毒(Sri Lankan cassava mosaic virus,SLCMV)是引发木薯花叶病的病原物之一,SLCMV是典型的双组分双生病毒,其基因组由DNA-A和DNA-B两个环状组分组成.无义介导的mRNA降解(nonsense-mediated mRNA decay,NMD)是真核细胞mRNA降解的主要途径之一,也是真核生物普遍存在的抗病毒防御机制.越来越多的研究显示,NMD 不仅是真核生物重要的 mRNA 数量、质量调控机制,还与转录后基因沉默(post transcriptional gene silencing,PTGS)同样能降解病毒RNA,是真核生物普遍存在的抗病毒防御机制.NMD的mRNA衰减过程包括PTC的识别、脱腺苷酸、脱帽和最后的核酸外切酶降解 4 个过程,UPF1、PARN、DCP2 和XRN4 分别是上述 4 个过程中的关键蛋白.病毒是专性寄生生物,必须逃避或耐受寄主细胞的降解,才能成功感染.聚腺苷酸特异性核糖核酸酶[poly(A)-specific ribonuclease,PARN]是NMD信号通路的一个关键因子.目前,关于 SLCMV 抵御寄主 NMD 的分子机制尚不明确.本研究采用酵母双杂交(yeast two-hybrid system)和荧光双分子互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)试验证明斯里兰卡木薯花叶病毒(SLCMV)编码的沉默抑制子AC4 与拟南芥PARN相互作用.据此推测SLCMV AC4 蛋白可能通过与AtPARN相互作用而抑制寄主 NMD 的病毒防御功能帮助病毒逃避或耐受寄主细胞的降解.研究结果为阐明木薯花叶病毒调控寄主NMD抗病毒防御功能的分子机理奠定基础.
关键词： 斯里兰卡木薯花叶病毒(SLCMV) AC4蛋白 聚腺苷酸特异性核糖核酸酶(PARN) 酵母双杂交(Y2H) 荧光双分子互补(BiFC)
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