科研产出
象耳豆根结线虫纤维素结合蛋白Me-cbp-1基因的克隆与功能分析
《农业生物技术学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：纤维素结合蛋白(cellulose binding protein,CBP)是植物寄生线虫在侵染过程中分泌的重要效应蛋白。为了获得象耳豆根结线虫(Meloidogyne enterolobii)纤维素结合蛋白序列信息、并分析其在线虫寄生致病过程中的功能地位,本研究利用已构建的象耳豆根结线虫二龄幼虫转录组数据库,结合cDNA末端快速扩增(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术克隆了象耳豆根结线虫纤维素结合蛋白基因Me-cbp-1(Gen Bank登录号:KU350655)cDNA全长序列。生物信息学分析表明,Me-cbp-1 cDNA全长809bp,其5'末端和3'末端的非编码区长度分别为43和139 bp,以及含有1个长度为627 bp的完整开放阅读框(ORF),推导编码208个氨基酸。预测蛋白Me-cbp-1含有起分泌功能的信号肽结构和纤维素结合结构域。同源性搜索比对分析表明,象耳豆根结线虫Me-cbp-1与南方根结线虫(M.incognita)、爪哇根结线虫(M.javanica)及花生根结线虫(M.arenaria)纤维素结合蛋白具有88%~91%的相似性。原位杂交显示,Mecbp-1在象耳豆根结线虫二龄幼虫的亚腹食道腺细胞特异表达。利用RNAi技术对象耳豆根结线虫二龄幼虫的Me-cbp-1基因进行沉默后,导致二龄幼虫的侵染率显著降低。本实验结果初步证明了纤维素结合蛋白在象耳豆根结线虫二龄幼虫侵染寄主的过程中具有重要地位,推测其通过与细胞壁主要成分纤维素结合,促进植物细胞壁的软化和降解,从而有利于提高线虫的侵染和寄生能力。本研究为揭示象耳豆根结线虫分子寄生致病机制以及进一步研究防治根结线虫病害新策略提供了理论依据。
关键词： 象耳豆根结线虫 纤维素结合蛋白 原位杂交 RNA干扰
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橡胶树胶孢炭疽菌P型ATP酶基因CgATPase 01的敲除及表型分析
《热带作物学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：为了了解橡胶树胶孢炭疽菌的一个钙转运P型ATP酶基因Cg ATPase01的功能,本研究利用Splitmarker技术构建敲除载体,通过PEG介导原生质体转化对橡胶树胶孢炭疽菌菌株HBCg01的Cg ATPase 01基因进行敲除,根据表型变化及致病性检测对其功能进行分析。结果表明:通过Split-marker方法获得了敲除突变体△Cg ATPase01,表型分析发现该突变体与野生菌株间存在明显差异,病菌气生菌丝的颜色发生了改变,生长速率降低,产孢量下降,对橡胶树叶片的致病性减弱,推测该基因可能在橡胶树胶孢炭疽菌的产孢、生长发育和致病性等方面具有重要作用。本研究结果为进一步研究胶孢炭疽菌P型ATP酶基因功能和病原菌的致病机理奠定了基础。
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67份柱花草耐盐性综合评价
《热带作物学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：采用水培的方法,在200 mmol/L Na Cl胁迫条件下对23个不同种的67份柱花草(Stylosanthes Sw.)进行耐盐性评价。盐处理15 d后对枯叶率(WLR)、相对生长量(RG)、叶绿素(Chl)含量和相对含水量(RWC)进行测定。结果表明:柱花草不同种及同一种的不同材料间耐盐能力存在显著差异;相关分析表明,WLR与Chl含量、RG及RWC呈显著负相关,相关系数分别为0.87、0.78及0.59,而FW与Chl含量呈显著正相关,相关系数达0.72。主成分分析得到2个主成分,可以解释总变化的89.83%。隶属函数法耐盐能力排序及聚类分析表明,直立柱花草CIAT11900、马弓形柱花草Fine stem、有钩柱花草CIAT1010、灌木黏质柱花草CIAT11052、弱脉柱花草CIAT11927和有钩柱花草Verano的耐盐性最强,有望在滨海盐渍土的改良中应用。
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黄胸蓟马对乙基多杀菌素的抗性选育及抗性风险评估
《应用昆虫学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：[目的]评估黄胸蓟马Thrips hawaiiensis对乙基多杀菌素的抗性发展动态、抗性风险,旨在为该虫的科学防治及合理用药提供理论依据。[方法]毒力测定采用叶管药膜法(TIBS),采用群体淘汰法获得黄胸蓟马对乙基多杀菌素的抗性种群,并采用Tabashnik的域性状分析法计算抗性现实遗传力(h~2)和测算不同选择压下抗性发展速率。[结果]经过20代17次的选育,黄胸蓟马对乙基多杀菌素的抗性达19.42倍,平均抗性现实遗传力h~2为0.1317;根据抗性发展规律,获得4个选育阶段的h~2,分别为0.1960(G_1~G_3)、0.1796(G_5~G_9)、0.1262(G_(11)~G_(14))和0.0944(G_(16)~G_(20));通过平均抗性现实遗传力h~2=0.1317,预测不同选择压(死亡率=50%、60%、70%、80%、90%、99%)下,抗性上升10倍所需要的代数分别为:16.68代、13.70代、11.21代、9.52代、7.55代、2.55代。[结论]黄胸蓟马对乙基多杀菌素具有一定的抗性风险,应注意科学合理用药。
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HPLC-ELSD法测定木薯块根中蔗糖、葡萄糖、果糖的含量
《分子植物育种 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：可溶性糖为木薯块根淀粉的合成提供底物和能量,准确测定其含量有助于进一步了解木薯块根淀粉积累过程。本研究以水提法提取木薯块根中的可溶性糖,采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLCELSD)测定样品中果糖、葡萄糖、蔗糖的含量。以Waters-NH2色谱柱结合Alltech 3300 ELSD蒸发光检测器进行糖含量的测定,流动相为乙腈/水(70/30,V/V),含0.1%的氨水。果糖、葡萄糖和蔗糖的分离效果较好,在1~25μg范围内线性关系良好,精密度RSD分别为0.31%、0.22%和1.42%,回收率分别为97.62%、98.03%、96.30%,样品稳定性实验的RSD分别为0.88%、0.48%和1.05%。实验结果表明HPLC-ELSD法是分析木薯块根中的蔗糖、葡萄糖、果糖含量的有效技术,可为研究淀粉含量不同的木薯品种在糖代谢过程中的差异奠定基础。
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西芹醇层物对黄瓜枯萎病菌的化感作用及化感物质鉴定
《中国生物防治学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：枯萎病是黄瓜栽培过程中较为严重的真菌病害,目前对该病防治非常困难。生产中发现西芹与黄瓜轮作能够降低黄瓜枯萎病的发病率。为探明西芹鲜根中对黄瓜枯萎病菌F.oxysporum f.sp.cucumerinum有抑制作用的化感物质成分,利用连续柱层析法对西芹鲜根乙醇浸提液进行了4次柱层析,每次层析后获得的流分与黄瓜枯萎病菌共培养,测定菌落直径并计算其化感效果,以化感抑制效果筛选最佳流分;然后将最佳流分与黄瓜枯萎病菌在液体培养基中共培养,测定其菌体分泌的镰刀菌酸的含量;最后对第4次层析最佳流分进行GC-MS检测。结果表明,第4次层析最佳流分作用于黄瓜枯萎病菌后,对其菌落生长及分泌镰刀菌酸的能力均产生抑制作用;化感效果分别达到了54.59%、52.35%、51.55%和50.97%,镰刀菌酸含量下降到38.09%、59.54%、36.78%和36.65%;第4次层析最佳流分中,共鉴定出酸类、酯类、酚类、醇类及含氮化合物等5类16种化感物质,分别为十六烷基胺、16-甲基十七烷酸甲酯、十六酸、2,4-二甲基-苯并[b]喹啉、D-异薄荷醇、2,6-二叔丁基对甲酚、α-阿拉伯呋喃糖苷、硬脂醇乙酸酯、9,12-十八碳二烯酸、2-羟基丙酸、顺-9-十六(碳烯酸)、月桂酸乙酯、芴-2-偶氮-2,4-二羟基苯、甘露糖醇月桂酸酯、薄荷呋喃、4-甲氧基水杨酸。研究获得的结果可为西芹提取物防控黄瓜枯萎病提供理论依据。
关键词： 西芹鲜根 黄瓜枯萎病 化感作用 镰刀菌酸 化感物质
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芒果叶片双向电泳体系的建立及优化
《基因组学与应用生物学 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：为建立适用于芒果叶片总蛋白的双向电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)体系,使用3种方法(尿素/硫脲法,酚法和三氯乙酸/丙酮法)提取芒果叶片蛋白,采用2种水化方式(主动水化和被动水化)和4种样品上样量(1 000μg,1 300μg,1 500μg,1 800μg)进行双向电泳,G-250考染后,通过PDQuest软件对双向电泳图谱进行比较分析。结果表明,三氯乙酸/丙酮法提取效果最好,所得单向SDS-PAGE条带数与2-DE蛋白点数均多于其它2种方法;主动水化对高丰度蛋白点聚焦效果较好;1 500μg蛋白上样量电泳图谱分辨率最高。该方法的建立为开展芒果蛋白质组学研究提供了参考。
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超高效液相色谱-串联质谱法测定甘蓝中三乙膦酸铝的残留
《农药学学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：建立了一种超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)检测甘蓝中三乙膦酸铝残留的方法。通过测定甘蓝样品中乙基磷酸和亚磷酸的含量,对三乙膦酸铝进行定量。采用电喷雾负离子(ESI–)电离,多反应监测模式(MRM)定性分析,基质匹配标准曲线外标法定量。结果表明:三乙膦酸铝在不同配比的乙腈-水溶液中均可解离为乙基磷酸和亚磷酸,且二者的质量比均为40:60;三乙膦酸铝的检出限(LOD)为1.3μg/kg;在10~500μg/L范围内,乙基磷酸和亚磷酸的线性相关系数均大于0.999;在0.01、0.1和0.5 mg/kg 3个添加水平下,甘蓝中三乙膦酸铝的平均回收率在82%~107%之间,相对标准偏差(RSD)在6.7%~9.2%(n=5)之间。该方法简单、快速,灵敏度及准确度高,可满足甘蓝中三乙膦酸铝残留的检测要求。
关键词： 超高效液相色谱-串联质谱 甘蓝 三乙膦酸铝 乙基磷酸 亚磷酸 残留
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‘金煌’杧果MiCAB2的克隆及表达与花期调控关系分析
《园艺学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：以‘金煌’杧果(Mangifera indica L.‘Jinhuang’)为试材,通过RACE及PCR技术克隆得到叶绿素a/b结合蛋白CAB基因的cDNA全长,命名为MiCAB2(GenBank登录号:KT944730)。该基因全长为990 bp,含795 bp开放阅读框,编码246个氨基酸,与橄榄(Canarium album)亲缘关系最近。MiCAB2属于叶绿素a/b结合蛋白家族,其氨基酸序列中存在一个典型的捕光叶绿素a/b结合蛋白功能域、3个蛋白激酶C磷酸化位点和4个N–肉豆蔻酰位点。实时荧光定量PCR检测表明:MiCAB2在杧果各组织中均表达且表达量差异较大,在成熟叶片中表达量最高,在花、胚胎、果实中表达量仅为叶片的1/50~1/12,在根和茎中极低;在花芽分化至开花期表达量呈迅速上升后下降再上升趋势,在正常胚胎中呈下降后回升再下降趋势,而在败育胚胎中呈逐渐下降趋势;叶片在昼夜交替中,白天表达量明显高于夜晚,14时最高,22时最低。MiCAB2受不同催花药剂的诱导,乙烯利作用最为明显,硝酸钾次之,两者均为正向调控,而多效唑起负调控作用。
关键词： 杧果 捕光叶绿素a/b结合蛋白基因 MiCAB2 克隆 花期调控 败育胚胎
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娄彻氏链霉菌XL-6的抑菌活性及对茄子幼苗的防病促生效应
《中国生物防治学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：本文研究了娄彻氏链霉菌Streptomyces rochei XL-6无菌发酵液在自然状态下的抑菌活性及对茄子幼苗的防病促生效果。结果表明,菌株XL-6发酵液的抑菌活性物质可耐70℃高温,在pH 5~8其抑菌活性保持稳定;该抑菌活性物质不受紫外线、蛋白酶K和胰蛋白酶的影响,在4℃条件下贮藏28 d仍可保持良好的抑菌活性。采用不同浓度的发酵液处理茄子幼苗均可提高茄苗对青枯病的抗性,其中,施用40倍发酵液显著降低茄子青枯病发病率和病情指数并显著提高PAL和PPO酶活性,对盆栽茄子的防治效果达64.78%。同时,40倍发酵液显著提高茄子种子发芽率、鲜重、叶绿素含量及根系活力,较病原菌菌体处理和无菌水处理,茄苗干重增幅分别达15.81%和27.95%,对茄苗的促生效果显著。说明适宜浓度的拮抗菌XL-6发酵液兼具防治茄子青枯病和促进植株生长的效果。
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