科研产出
光萼荷属植物SSR反应体系确立与指纹图谱构建
《植物研究 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：利用正交试验设计优化并确立光萼荷属(Aechmea)植物SSR反应体系,构建部分光萼荷属植物的SSR分子指纹图谱。结果表明:光萼荷属植物的最佳SSR反应体系为10μL总体积包括1×PCR buffer、Mg2+2.0 mmol.L-1、dNTPs 200μmol.L-1、引物2.5μmol.L-1、模板DNA 90 ng和Taq DNA聚合酶1.5 U。利用该体系和6对SSR引物对15份光萼荷属植物进行扩增反应和电泳检测,其中M1、M3、M4等3对SSR引物扩增图谱清晰、多态性较高,均能将该15份光萼荷属植物鉴别出来,初步建立了15份光萼荷属植物的SSR分子指纹图谱,进一步证明该SSR反应体系稳定可靠,可以有效用于光萼荷属植物种质资源鉴定。
关键词： 光萼荷属 SSR 正交实验设计 反应体系优化 指纹图谱
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新烟碱类和大环内酯类杀虫剂对四种赤眼蜂成蜂急性毒性和安全性评价
《昆虫学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：为了明确新烟碱类和大环内酯类杀虫剂对天敌赤眼蜂Trichogramma spp.的影响,在室内采用药膜法测定了其对稻螟赤眼蜂Trichogramma japonicum Ashmead、亚洲玉米螟赤眼蜂Trichogramma ostriniae Pang et Chen、拟澳洲赤眼蜂TrichogrammaconfusumViggiani和广赤眼蜂Trichogramma evanescens Westwood成蜂的急性毒性,并进行了安全性评价。急性毒性测定结果表明:在测定的新烟碱类药剂中,噻虫嗪对拟澳洲赤眼蜂和稻螟赤眼蜂表现出最高的急性毒性,其LC50分别为0.24(0.21～0.27)和0.40(0.37～0.44)mga.i./L;其次为烯啶虫胺,该药剂对上述两种赤眼蜂的LC50分别为0.83(0.74～0.96)和0.72(0.65～0.80)mga.i./L;而吡虫啉对亚洲玉米螟赤眼蜂和拟澳洲赤眼蜂的毒性最低,其LC50分别为502.13(459.80～549.62)和752.62(687.51～828.63)mga.i./L。在测定的大环内酯类药剂中,阿维菌素对稻螟赤眼蜂的急性毒性最高,其LC50为0.49(0.46～0.65)mga.i./L,而甲氨基阿维菌素苯甲酸盐对拟澳洲赤眼蜂表现出最低的急性毒性,其LC50为21.76(19.59～24.40)mga.i./L。安全性评价结果表明,吡虫啉、啶虫脒、氯噻啉和甲氨基阿维菌素苯甲酸盐对4种赤眼蜂为低风险～中等风险性,安全性系数为0.57～23.54;噻虫啉和依维菌素对4种赤眼蜂却为中等风险～高风险性,安全性系数为0.16～3.45;而烯啶虫胺、噻虫嗪和阿维菌素对4种赤眼蜂为高风险～极高风险性,安全性系数为0.01～0.15。本研究测定的大部分杀虫剂对赤眼蜂都有一定的急性毒性风险。因此,在害虫综合治理中应谨慎使用新烟碱类和大环内酯类杀虫剂尤其是烯啶虫胺、噻虫嗪和阿维菌素,以免造成对赤眼蜂的大量杀伤。
关键词： 赤眼蜂 杀虫剂 新烟碱类 大环内酯类 毒副作用 卵寄生蜂 急性毒性 安全性评估
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TaqMan探针实时荧光定量PCR检测番茄黄化曲叶病毒
《浙江农业学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：根据番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)外壳蛋白(CP)基因序列上的保守序列,设计特异性的引物和Taqman探针,建立荧光定量PCR方法。结果表明,试验建立的标准曲线循环阈值(Ct值)与模板浓度具有良好的线性关系,相关系数为0.9941;能检测到1 000个病毒拷贝,灵敏度比普通PCR高100倍;与番茄花叶病毒和黄瓜花叶病毒无交叉反应,特异性强、重复性佳,为TYLCV检测提供了一种特异、灵敏、快速的定量检测方法。
关键词： 番茄黄化曲叶病毒 实时荧光定量PCR Taqman探针 定量检测
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猪瘟病毒E0蛋白对IFN-β启动子的抑制作用研究
《江西农业大学学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：以新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)为IFN-β诱导剂,将猪瘟病毒(Classical swine fever vires,CSFV)E0基因的C末端与增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protem,EGFP)基因相连,瞬时表达于猪。肾细胞PK15中,利用荧光素酶报告基因系统检测IFN-β启动子的活化状态,结果显示CSFV E0蛋白可抑制NDV对IFN-β启动子的诱导作用,抑制效应随E0蛋白量增加而增强;半定量RT-PCR结果显示,E0蛋白可明显降低IFN-βmRNA的生成量。结果表明,E0蛋白具有干扰素拮抗功能。该研究为阐明CSFV的致病及持续感染机制提供了理论支持。
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两种纤溶酶的酶学性质比较与溶栓机理分析
《中国食品学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：对芽孢杆菌(Bacillus sp.nov.SK006)发酵产生的两种纤溶酶(SPFE-1和SPFE-2)的酶学性质和溶栓机理进行分析比较,并研究其酶促反应动力学参数。试验结果表明:SPFE-1和SPFE-2具有较好的耐热性和pH稳定性;Zn2+能促进SPFE-1的纤溶活力,但强烈抑制SPFE-2;PMSF对SPFE-1h具有强烈的抑制作用;SPFE-1和SPFE-2都可直接降解纤维蛋白,也可激活纤溶酶原,从而间接降解纤维蛋白;SPFE-1最先降解纤维蛋白原的β链,然后是α链,很难降解γ链;SPFE-2顺次降解纤维蛋白原的α、β和γ链;SPFE-1和SPFE-2有较强的酰胺水解活性,最适底物为N-Succ-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA;其作用于最佳底物的特征常数:Km=0.6/0.51mmol/L;kcat=712/154.25/s;kcat/Km=1.19×106/3.02×105L/(mol·s)。
关键词： 芽孢杆菌 纤溶酶SPFE-1和SPFE-2酶学性质 纤溶机理 反应动力学
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鸡CACNA1S基因SNPs及其与部分屠体性状的关联性研究
《黑龙江畜牧兽医 》 2012 北大核心
摘要：为了研究L型钙离子通道α1亚单位(CACNA1S)编码基因与动物肌肉收缩和发育的关系,试验采用PCR-SSCP技术,首次对萧山鸡、仙居鸡、灵昆鸡、萧山鸡×仙居鸡杂交F1代、爱拔益加鸡(AA鸡)CACNA1S基因5'-调控区(5'-UTR)和外显子1进行多态性检测,同时结合屠体性状进行关联分析。结果表明:试验群体CACNA1S基因5'-UTR和外显子1存在2个单核苷酸多态性(SNPs)位点与屠体性状关联;SNPs716位点JJ基因型的胸肌率极显著大于KK基因型(P<0.01),SNPs1711位点YY基因型的胸肌率极显著大于XY和XX基因型(P<0.01),YY基因型的半净膛率极显著大于XX基因型(P<0.01)。初步推断CACNA1S基因可能是影响鸡部分屠体性状(全净膛率、半净膛率、胸肌率、腿肌率)的主效基因或与主效基因连锁,并且这些突变位点可能作为分子遗传标记用来选择鸡的屠体性状。
关键词： 鸡 L型钙离子通道α1亚单位(CACNA1S)编码基因 单核苷酸多态性(SNPs) PCR-SSCP 屠体性状 关联分析
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亚洲棉中与棕色素合成相关基因GaTT12a的克隆及表达特征
《农业生物技术学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：棕色棉具有典型的自然棕色纤维,在纺织及加工过程中无需漂染,是真正的"生态"、"环保"棉。克隆并了解棉花纤维棕色素合成相关基因对于揭示棉花纤维色素发育的分子机理具有重要的意义。本研究选取亚洲棉(Gossypium arboreum)棕色纤维慈溪紫棉和白棉余姚中棉纤维发育不同阶段RNA,采用Gene Fishing技术,获得1条仅在亚洲棉棕色棉纤维中特异表达的约500bp的PCR扩增产物,根据测序结果和生物信息学分析发现,该基因在核苷酸序列上与拟南芥(Arabidopsis thaliana)种皮棕色素合成TT12基因存在76%的序列同源性。随后利用RT-PCR的方法克隆了该基因,命名为GaTT12a(GenBank登录号:JX013908),该基因编码490个氨基酸残基,分子量约52.7kD,属于MATE超基因家族中的一个成员。利用荧光定量PCR分析了GaTT12a基因在发育不同阶段纤维、种皮的表达特征,结果表明,GaTT12a基因在棕色纤维、白色棉种皮和棕色棉种皮中均优势表达,在白色棉纤维中几乎不表达,说明该基因参与纤维棕色素的形成,结果暗示棉花种皮棕色素和纤维棕色素可能分享相似的合成代谢途径。研究结果为进一步了解GaTT12a基因参与棕色棉纤维色素形成、棕色棉纤维色素与种皮棕色素合成之间的关系提供了基础研究资料。
一步法TaqMan~探针实时荧光定量RT-PCR快速检测PRRSV的建立及初步应用
《浙江农业学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的序列,设计了1对特异性引物和1条TaqMan探针,建立了一步法检测PRRSV的荧光定量RT-PCR方法。结果表明,建立的方法具有较高的特异性,与PCV,JEV,SFV,PRV,PPV无交叉反应;可以检测到10个拷贝数的模板RNA或1个TCID50的PRRSV,比常规RT-PCR方法的灵敏度高10倍;对同一样品进行4次重复试验,变异系数(CV)<1%,具有较好的重复性。应用建立的荧光定量RT-PCR和常规RT-PCR对72份PRRS疑似病例肺组织进行平行检测,结果荧光定量RT-PCR检出40份阳性,高于常规RT-PCR方法(28份阳性)。建立的荧光定量RT-PCR方法特异性好、灵敏度高,而且快速简便,可用于PRRSV的实验室快速诊断和流行病学调查。
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 实时荧光定量RT-PCR 一步法
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鹅ACSL4基因克隆及其与肝脂质沉积的关系研究
《中国畜牧杂志 》 2012 北大核心
摘要：本研究旨在克隆鹅长链酯酰辅酶A合成酶4(ACSL4)基因,探讨其与鹅肝脂质沉积的关系和品种间的表达差异。本实验通过RT-PCR、实时定量等技术扩增鹅ACSL4基因CDS、检测了该基因在皮脂、腹脂、肝脏等10个组织中的表达情况及填饲对其在肝脏中表达的影响,并探讨其表达量与血浆胰岛素、鹅肝脏甘油三酯(TG)、肝重等指标间的相关性。结果表明:鹅ACSL4基因CDS全长2 013 bp,编码670个氨基酸。保守结构预测发现,其蛋白质与哺乳动物一样,也存在2个保守功能区(ATP/AMP motif和FACS motif),它与鸡、人、猪、小鼠、大鼠的同源性分别为96.9%、80.4%、80.1%、78.5%、78.4%;组织表达结果显示,该基因主要于大脑、腹脂、心肌、睾丸等组织中表达,而在肝脏中表达相对较低;填饲引起ACSL4 mRNA在鹅肝脏的表达丰度极显著增加(P<0.01);且与肝脏脂质沉积相关指标呈显著正相关(P<0.05),暗示其在鹅肝脂肪变性中可能扮演着重要的角色。
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