科研产出
猪流行性腹泻病毒S蛋白外分泌信号肽筛选及稳定表达细胞系的构建
《中国兽医科学 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：为了优化在真核细胞中猪流行性腹泻病毒（PEDV）S蛋白的分泌表达，且构建稳定表达的细胞系，本研究设计合成了9个信号肽引物，通过同源重组的方式得到表达PEDV变异株AH2012/12株S全长蛋白的9个重组表达质粒，瞬时转染HEK 293T细胞后，通过Western-blot验证蛋白外分泌表达水平，结果显示，筛选出的含跨膜蛋白酶丝氨酸信号肽的S蛋白具有较好的外分泌表达特性；利用G418筛选，获得稳定表达PEDV S蛋白的单克隆细胞，通过传代验证不同代次的蛋白表达水平，成功构建了可稳定外分泌表达PEDV S的CHO细胞系。结果显示，可在100 m L CHO-PEDV/S细胞培养上清中获得约5 mg的PEDV S蛋白，提高了PEDV S蛋白的表达和分泌，为进一步研制PEDV亚单位疫苗奠定了基础。
关键词： 猪流行性腹泻病毒 S蛋白 信号肽 稳定表达 亚单位疫苗
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新形势下江苏省农业种质资源保护与利用研究
《农业科技管理 》 2024
摘要：种业是现代农业的芯片,农业种质资源保护与利用是推动种业科技创新的重要物质基础,在全面推进乡村振兴,深入贯彻落实种业振兴行动中处于关键环节.新时代背景下,种业科技创新对种质资源保护与利用提出了新要求.文章阐述了江苏省农业种质资源保护与利用工作的发展历程和现状,分析了取得的主要成效和管理服务过程中存在的主要问题,结合新时期农业科技发展的要求,从加强种质资源精准鉴定评价与深度挖掘利用、健全种质资源共享机制、加强条件设施和人才队伍建设等方面提出了加强农业种质资源保护与利用的对策与建议,旨在为相关主管部门科学决策提供理论参考和智力支撑.
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不同播期下大蒜越冬生理特性研究
《北方农业学报 》 2024
摘要：[目的]探究江苏省徐州市不同播期对大蒜生长发育和生理特性的影响,明确该地区大蒜最适播种时期.[方法]以徐蒜 3 号为试验材料,设置 2022 年 9 月 20 日(T1)、9 月 25 日(T2)、9 月 30 日(T3)、10 月 5 日(T4)、10 月 10 日(T5)、10月 15日(T6)、10 月20 日(T7)、10 月25 日(T8)、10月30 日(T9)和11月4日(T10)10个播期.在越冬期和返青期分别测定株高、假茎高、叶长、叶宽、假茎粗,根部、假茎、叶片的鲜重和干重,叶片叶绿素含量、相对电导率、丙二醛(MDA)含量、可溶性蛋白含量、游离脯氨酸含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化物酶(POD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性.[结果]在越冬期,T4 播期大蒜叶长(43.33 cm)、叶宽(2.18 cm)、假茎粗(11.14 mm)均达到最高;相对电导率最低(14.76%);MDA含量较低(0.142 μmol/g);游离脯氨酸含量最高(2.99 μg/g);POD活性最高(291.00 U/g).T5播期假茎高最高(2.53 cm),与其他播期相比差异显著(P<0.05);根部鲜、干重(3.91、0.49 g),假茎鲜、干重(7.34、1.23 g),叶片鲜、干重(10.34、2.33 g)均最大;叶绿素总量(0.892 mg/g)、可溶性蛋白含量(1.93 mg/g)均最高,且与其他播期相比差异显著(P<0.05);MDA含量较低(0.142 μmol/g);SOD活性(283.78 U/g)和CAT活性(11.38 U/g)最高.在返青期,T4播期大蒜株高最高(51.73 cm);根部干重最大(1.04 g);相对电导率最低(20.58%);游离脯氨酸含量最高(6.31 μg/g);POD活性(128.72 U/g)最高.T5 播期假茎高(15.60 cm)、叶长(38.10 cm)、假茎粗(17.07 mm)均最高;根部鲜重最大(5.66 g);假茎鲜、干重(29.00、4.89 g),叶片鲜、干重(27.80、3.77 g)均最大;叶绿素总量最高(1.016 mg/g);MDA含量(0.049 μmol/g)最低,且与其他播期相比差异显著(P<0.05);可溶性蛋白含量最高(2.33 mg/g);SOD活性(276.31 U/g)和CAT活性(10.30 U/g)最高.[结论]选择10月5日和10月10日播期时,大蒜植株长势较好、抗寒能力较强,可作为江苏省徐州市的适宜播种时期.
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真空预冷对采后娃娃菜流通及货架品质的影响
《食品工业科技 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：为优选娃娃菜真空预冷的处理条件,维持采后娃娃菜的新鲜品质,在分析不同真空预冷终温(0、2和4℃)和不同真空预冷终压(400、600、800和1000 Pa)对采后娃娃菜预冷效果的基础上,进行了二因素三水平的中心复合响应面试验.结果显示,与不经预冷处理的对照和终温0℃的预冷组相比,在终压600 Pa条件下,2~4℃的预冷终温处理可更好地维持采后娃娃菜的外观品质,抑制其呼吸速率和丙二醛(MDA)含量的升高.在终温2 ℃条件下,与不经预冷处理的对照和终压1000 Pa的预冷组相比,400~800 Pa的预冷终压处理可更好地维持采后娃娃菜的外观品质,抑制其呼吸速率及MDA含量的升高.进一步的中心复合响应面试验结果显示,采后娃娃菜的真空预冷最优条件为终温4.0 ℃、终压600 Pa,该真空预冷条件不仅可维持采后娃娃菜的较好品质,而且可使活性物质可溶性蛋白、总酚和抗坏血酸的含量分别提高18.78%、18.47%和33.23%.因此,适宜的真空预冷处理是一种极具潜力的商品化处理技术,能有效维持采后娃娃菜在流通及货架期间的良好品质.
关键词： 真空预冷 娃娃菜 终温 终压 总酚 可溶性蛋白 抗坏血酸 货架期
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猪肺炎支原体LAP的结构预测及其抑制剂Bestatin对支原体生长的影响
《中国动物传染病学报 》 2024 北大核心
摘要：本研究旨在以猪肺炎支原体为代表，研究支原体LAP酶活中心的高级结构及其被抑制后对支原生长的影响。亮氨酸氨肽酶（LAP）是一类广泛存在于各类生物的氨基酸代谢酶，有研究表明病原微生物的LAP酶活中心被抑制后可以直接影响微生物的代谢和生长。本研究拟以猪肺炎支原体（Mhp）LAP为模型，研究其理化特性和高级结构，探索LAP抑制剂乌苯美司（Bestatin）对支原体生长的影响。本研究首先用Clustal Omega进行序列同源性比较，分析LAP活性位点在不同支原体中的保守情况。然后采用GST融合标签表达猪肺炎支原体LAP蛋白，通过GST亲和层析和分子筛层析纯化蛋白，圆二色谱测定LAP的二级结构，用Alpha fold 2预测三级结构。最后用Bestatin与猪、鸡、羊等不同种属的支原体共培养来观察其影响。结果表明虽然总体序列同源性不高，但是LAP酶活中心的关键位点在常见支原体相对保守。猪肺炎支原体LAP可以通过GST标签进行可溶性表达。酶切GST标签后，分子筛层析显示LAP是六聚体，圆二色谱表明LAP具有正确的二级结构。预测的LAP三级结构显示其具有保守的底物结合关键位点。Bestatin对不同种属支原体的生长均产生抑制，且呈现剂量依赖性，但在不同菌株间存在差异，最低在6 μg/mL的浓度可通过抑制氨肽酶的活性抑制猪肺炎支原体的生长。该研究为新一代抗菌药物的研发提供了新的思路。
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基于全长转录组的蚕豆WRKY基因家族分析及耐盐胁迫相关候选基因挖掘
《江苏农业学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：WRKY基因是植物特有的转录因子基因,能够调控植物的生长发育和胁迫响应.为了鉴定蚕豆WRKY基因家族成员,揭示其进化关系并挖掘与盐胁迫相关的候选WRKY基因,本研究在完成蚕豆全长转录组测序(9 个样品)和二代转录组测序(27 个样品)的基础上,利用生物信息学方法对WRKY转录因子基因进行鉴定与分析,并通过拟南芥同源基因比对挖掘盐胁迫相关的候选VfWRKY基因.结果表明,蚕豆全长转录组测序共获得 53.84 Gb数据量,通过比对和校正最终获得58 885条转录本序列信息;基于蚕豆全长转录组共鉴定出 113 个WRKY家族成员,氨基酸数目为153~737 aa,等电点为4.84~9.87,113 个WRKY家族蛋白质全部定位于细胞核中;根据拟南芥WRKY家族系统发育特征,VfWRKY基因家族可分为 3 组,分别为group 1(38 个VfWRKY)、group 2(61 个VfWRKY)、group 3(14 个VfWRKY);Motif 1 和Motif 3 是VfWRKY基因家族的特征基序,并对应WRKY保守结构域,在进化过程中较为保守;VfWRKY基因家族主要富集在植物MAPK信号通路、植物与病原菌相互作用和剪接体 3 个通路中;通过同源比对,在蚕豆中发现 14 个盐胁迫相关候选WRKY基因,且主要在根中高表达.该研究结果为蚕豆的遗传学研究提供了丰富的参考数据,也为创制耐盐蚕豆新品种提供了基因信息.
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工厂化水产养殖设施保温技术研究进展
《现代农业科技 》 2024
摘要：工厂化水产养殖起源于 20 世纪 60 年代,其较传统粗放式养殖在生产各环节可调控、水质可处理,养殖模式符合节能环保理念,在我国发展迅速.本文介绍了工厂化水产养殖设施的发展现状,综述了水产养殖大棚、水产养殖温室、水产养殖车间保温技术研究现状,并详细分析了养殖车间顶部保温技术和墙体保温技术(外墙外保温、外墙内保温、外墙中置保温),展望了未来发展方向和研究内容,以期为国内开展工厂化水产养殖设施保温技术的相关研究提供参考.
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聚合Wx-mp、fgr和Pi-ta、Pi-b基因选育优质粳稻新品种
《分子植物育种 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：以同时含有低直链淀粉含量基因Wx-mp、香味fgr基因、稻瘟病抗性基因Pi-b的优良食味粳稻中间品系‘宁7020’为母本，携带稻瘟病抗性基因Pi-ta的江苏抗病、高产粳稻品种‘扬粳9538’为父本，配置杂交组合进行聚合育种。利用3套自主研发的PCR检测体系稻瘟病Pi-ta和Pi-b的多重PCR体系、Wx-mp基因的四引物扩增受阻突变体系PCR检测技术、香味fgr基因的InDel标记检测技术，分别在不同的世代进行目标基因跟踪，结合抗性、香味和籽粒胚乳外观表型鉴定，成功地将上述4个基因聚合于一体，选育出优质、高产、多抗、早熟的水稻新品系‘南粳58’。本研究为选育多抗、优质水稻新品种提供了一种简单、快捷的选择技术，同时也为水稻抗病、优质育种提供新的种质资源。
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高质量发展下我国休闲农业知识产权保护研究
《农业工程 》 2024
摘要：随着农业新业态迅猛发展,我国农业新业态、新领域的知识产权保护显著滞后,尤其在休闲农业领域较为突出.加强相关领域知识产权保护,对于促进我国农业高质量发展和乡村振兴具有重要作用.但是由于休闲农业相关知识产权保护制度体系缺乏可借鉴的国际经验、制度执行缺少针对性的保护手段、新型经营主体知识产权保护意识差等问题,对休闲农业长期健康发展造成较大影响.因此,应基于对不同主体知识产权应用与保护诉求的充分了解,精准创设新型知识产权制度、加快管理方式创新、搭建多元参与平台,系统解决创意设计边界不清、农业资源权利主体模糊、技术更迭快过制度供给等问题.
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