木薯MeP5CS和MeP5CR基因克隆及其干旱胁迫下的表达分析

付莉莉; 韩冰莹; 谭德冠; 孙雪飘; 张家明; 《湖北农业科学 》 2016 北大核心

摘要：在不同浓度(0、20%、30%、40%、50%)PEG处理下考察木薯(Manihot esculenta Crantz)叶片中脯氨酸含量的动态变化。从木薯中分别克隆了Me P5CS和Me P5CR基因,对其序列进行生物信息学分析,并分析了Me P5CS和Me P5CR基因在20%PEG胁迫处理下各组织中的表达。结果表明,脯氨酸含量受渗透胁迫快速诱导,在一定范围内随PEG浓度升高而明显升高,表现出较好的相关性。序列分析表明,Me P5CS基因c DNA全长2 217 bp,编码738个氨基酸,含有P5CS保守结构域;Me P5CR基因c DNA全长828 bp,编码275个氨基酸,含有P5CR保守结构域,它们分别与麻风树和蓖麻中的P5CS、P5CR亲缘关系较近。Me P5CS和Me P5CR基因在转录水平受到渗透胁迫的调控。

关键词： 木薯(Manihot esculenta Crantz) Me P5CS Me P5CR 基因克隆 干旱 表达分析

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橡胶树橡胶粒子起源的超微结构分析

史敏晶; 吴继林; 郝秉中; 谭海燕; 田维敏; 《林业科学 》 2016 北大核心 CSCD

摘要：【目的】橡胶树乳管细胞所富含的一种特征性细胞器是橡胶粒子,其主要功能是合成和贮存天然橡胶,但该细胞器的起源仍无定论。通过观察不同发育阶段乳管细胞的超微结构,比较分析橡胶粒子的发育与其他细胞器之间的关系,探明橡胶粒子的起源,为进一步认识橡胶粒子的功能奠定基础。【方法】利用透射电子显微镜技术,观察橡胶树萌条幼茎和成龄树树干的树皮中不同发育阶段的乳管细胞超微结构,分析最初的橡胶粒子与其他细胞器之间的关系。【结果】幼嫩萌条的初生乳管细胞的细胞质浓厚,可辨认的最初的橡胶粒子呈电子致密小球,主要分布在富含内质网和核糖体的区域。成龄树树干树皮形成层附近的幼嫩次生乳管细胞中,分布有大量的内质网和比较稀疏的橡胶粒子,其他细胞器的形态也较清晰,适合作为研究橡胶粒子起源的材料。在高倍放大的情况下,可观察到直径约50 nm、内部呈电子致密的球形小颗粒直接与内质网相连接,在内质网周围存在直径逐渐增大的有明显界膜的球形颗粒,并且这些颗粒的内部开始呈现电子透明,这些特征与橡胶粒子的发育相吻合。虽然高尔基体周缘也存在一些球形泡状结构,但这些小泡的内含物呈颗粒状,与最初形成的橡胶粒子明显不同。在充分发育的成熟乳管细胞中充满橡胶粒子,而树皮外侧的衰老乳管细胞开始出现橡胶粒子凝固,在这2种类型的乳管细胞中都很难分辨不同类型的细胞器,因此不适合作为研究橡胶粒子起源的材料。【结论】通过观察不同类型和不同发育阶段的乳管细胞超微结构可知,靠近形成层的幼嫩次生乳管细胞是研究橡胶粒子起源的最佳材料。在这一发育时期的乳管细胞中,可以清晰地观察到最幼嫩的橡胶粒子与内质网紧密相连,而与其他细胞器没有直接联系,因此本文结果支持橡胶粒子主要起源于内质网这一观点。该结果不仅可为橡胶粒子的起源提供直接的细胞学证据,而且为其他细胞器起源的研究提供借鉴。考虑到大、小橡胶粒子的膜蛋白和功能的差异,有必要利用胶体金电镜免疫细胞化学定位技术进一步研究大、小橡胶粒子的起源问题。

关键词： 橡胶树 乳管细胞 超微结构 橡胶粒子 内质网

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日粮能量水平对五指山猪初情期性腺轴KISS-1/GPR54 mRNA水平表达影响

侯冠彧; 周汉林; 荀文娟; 施力光; 周雄; 黄显洲; 曹婷; 《基因组学与应用生物学 》 2016 北大核心 CSCD

摘要：本研究采用实时荧光定量PCR技术检测不同日粮能量水平对五指山猪初情期性腺轴Kiss-1、GPR54基因mRNA水平表达的影响。结果显示,在NRC和0.7 NRC两组实验猪的下丘脑、垂体、卵巢组织中均检测到Kiss-1、GPR54基因mRNA水平的表达;NRC组在下丘脑和卵巢kiss-1 mRNA表达量显著高于0.7NRC组(p<0.05),在垂体中的表达差异不显著(p>0.05);日粮能量水平对初情期性腺轴GPR54 mRNA表达差异不显著(p>0.05)。说明KISS-1/GPR54系统对动物初情表达的调节作用可能是通过调节下丘脑KISS-1基因的表达来实现。结果表明kiss-1 mRNA的表达规律在NRC组和0.7NRC组间保持一致,表达量依次为:下丘脑>垂体>卵巢;GPR54 mRNA的表达规律在NRC组和0.7NRC组间也保持一致,表达量依次为:卵巢>垂体>下丘脑,表明不同日粮水平的摄入并不影响Kiss-1、GPR54基因在各个组织中的表达规律。

关键词： 五指山猪 日粮能量水平 Kiss-1 GPR54 mRNA 初情期

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蜻蜓凤梨AfERF113基因的克隆与表达特性

雷明; 李志英; 王加宾; 乔飞; 徐立; 《西北农业学报 》 2016 北大核心 CSCD

摘要：观赏凤梨是一类重要的热带花卉,但有关其生长发育调控分子机理的研究相对匮乏,这在一定程度上限制了新品种的开发和利用。以热带观赏花卉蜻蜓凤梨(Aechemia fasciata)为材料,在分析蜻蜓凤梨转录组数据的基础上,结合cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术克隆了APETALA2/Ethylene Response Element Binding Protein(AP2/EREBP)家族的1个转录因子编码序列,并将其命名为AfERF113。生物信息学分析表明,AfERF113 cDNA全长1 093bp,有1个864bp的开放阅读框(open reading frame,ORF),编码287个氨基酸。蛋白质理化性质分析表明,该蛋白分子质量为29.768 5ku,理论等电点为6.06,为一类不稳定的酸性亲水蛋白。亚细胞定位软件预测表明该蛋白定位于细胞核。结构域分析表明,该蛋白有1个保守的AP2结构域,分属ERF亚族的B-4类,与拟南芥中所有ERF蛋白的ERF113亲源关系最近。实时荧光定量PCR(quantitative real time PCR,qRT-PCR)结果表明,AfERF113转录本在成熟株的根中表达量最高,且外源乙烯诱导后,AfERF113的表达量无论是在幼株还是在成株的各组织中均显著上调。研究结果证实,AfERF113响应了外源乙烯调控,为进一步研究AfERF113基因的功能及通过基因工程手段调控凤梨科植物生长发育提供了理论依据。

关键词： 蜻蜓凤梨 AP2/EREBP家族 AfERF113 乙烯 表达分析

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海南冬季瓜菜流通环节的利益分配分析

侯媛媛; 刘恩平; 李光辉; 汪佳滨; 占金刚; 《中国蔬菜 》 2016 北大核心

摘要：在海南冬季瓜菜流通中,运销商和零售商获取了链条中的大部分利润,农户不但分不到应有的利润,还承担着市场的大部分风险。实现海南冬季瓜菜流通环节利益均分、保护农民与消费者切身利益势在必行。

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香蕉枯萎病拮抗菌筛选及其抑菌活性

周登博; 井涛; 张锡炎; 起登凤; 陈宇丰; 王飞; 《植物保护学报 》 2016 北大核心 CSCD

摘要：为获得对香蕉枯萎病菌具有稳定拮抗作用的微生物菌株,分别从海南省临高县南宝镇新营农场、皇桐村及美台镇美梅村采集感病土壤和健康土壤进行微生物分离,并以香蕉枯萎病菌4号小种(Fusarium oxysporum f.sp.cubense Race 4)等9种病原菌为靶标菌株,采用平板对峙法和含药介质法对拮抗菌的抑菌活性进行评价,同时根据形态特征、培养特征及生理生化特征和16S rDNA序列分析对其进行鉴定。结果表明:6个土壤样品中共分离得到具有拮抗作用的细菌93株和放线菌133株,其中T3-G-59菌株对9种病原菌具有广谱抗性,菌丝生长抑制率为43.58%~86.43%,孢子萌发抑制率为42.22%~81.11%,其中对香蕉枯萎病菌4号小种的菌丝生长和孢子萌发抑制率分别为86.43%和81.00%,经鉴定该菌株为多产色链霉菌Streptomyces polychromogenes,表明该多产色链霉菌T3-G-59菌株具有应用于香蕉枯萎病生物防治的潜力。

关键词： 香蕉枯萎病 拮抗菌 鉴定

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六点始叶螨[Eotetranychus sexmaculatus (Riley)]对7种寄主植物的选择性研究

卢芙萍; 卢辉; 伍春玲; 梁晓; 陈青; 《热带作物学报 》 2016 北大核心 CSCD

摘要：用室内离体叶片饲养方法,研究了分别取食橡胶(Hevea brasiliensis)和7种目前常见的与橡胶间套种的作物[木薯(Manihot esculenta)、甘蔗(Saccharum officinarum)、菠萝(Ananas como sus)、椰子(Cocos nucifera)、杧果(Mangifera indica)、木瓜(Chaenomeles speciosa)和变叶木(Codiaeum variegatum)]后,六点始叶螨(Eotetranychus sexmaculatus)的存活、发育与繁殖情况差异。结果表明,取食木薯、甘蔗、菠萝、椰子和杧果后,六点始叶螨各龄均不能存活;而取食橡胶、木瓜和变叶木叶片后,其幼螨、前若螨、后若螨及卵到成螨的存活率均表现为橡胶(均为100%)>变叶木(68%、69%、77%和71%)>木瓜(53%、65%、54%和57%),存在显著差异(p<0.05);从卵到成螨的发育历期表现为橡胶(12.05 d)<变叶木(14.67 d)<木瓜(15.61 d),但三者间没有显著差异(p>0.05);平均每雌产卵量为橡胶(32.20粒)>木瓜(8.00粒)>变叶木(7.00粒),橡胶与木瓜和变叶木间存在极显著差异(p<0.01);F1代卵孵化率为橡胶(100%)>变叶木(97.53%)>木瓜(94.42%),仅橡胶与木瓜间存在显著差异(p<0.05);后代雌性百分率为橡胶(88.20%)>变叶木(75.40%)>木瓜(66.30%),三者间存在显著差异(p<0.05);成螨寿命为橡胶(19.58 d)>木瓜(19.33 d)>变叶木(17.00 d),仅橡胶与变叶木间存在显著差异(p<0.05)。研究结果表明,木薯、椰子、杧果、菠萝和甘蔗不适于六点始叶螨生存、发育与繁殖,因此为预防六点始叶螨的发生与危害,这5类作物可作为橡胶的间作套种作物;而变叶木和木瓜虽然影响六点始叶螨的发育与繁殖,但六点始叶螨仍可完成世代发育和繁殖,因此其亦为六点始叶螨的嗜好寄主,不适宜与橡胶间作套种。

关键词： 六点始叶螨 寄主选择性 发育与繁殖 间作套种

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木薯MeGWD3基因克隆及植物表达载体构建

付莉莉; 韩冰莹; 谭德冠; 孙雪飘; 张家明; 《南方农业学报 》 2016 北大核心 CSCD

摘要：【目的】克隆木薯葡聚糖水合双激酶(Me GWD3)基因并构建其植物表达载体,为开展木薯Me GWD3基因调控及功能研究提供参考。【方法】采用RT-PCR从木薯华南124(SC124)中克隆Me GWD3基因,对其进行序列分析,并将其连接至改造的p CAMBIA2300载体,构建植物表达载体p CAMBIA2300-Me GWD3。【结果】Me GWD3基因全长3522 bp,编码1173个氨基酸。经序列比对,发现Me GWD3基因序列与木薯Phytozome数据库中公布的GWD基因(cassava4.1_000497m)只存在2个碱基差异,同源性高达99.94%;与NCBI数据库中收录的木薯GWD基因(JN618460)同源性高达99.00%,与蓖麻GWD基因(XM_002518566)同源性达86.00%;成功构建植物表达载体p CAMBIA2300-Me GWD3。【结论】成功构建的植物表达载体p CAMBIA2300可用于Me GWD3基因功能及木薯淀粉代谢研究。

关键词： 木薯 葡聚糖水合双激酶 克隆 植物表达载体

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‘阿蒂莫耶’番荔枝花期挥发性成分和香味特征分析

乔飞; 江雪飞; 徐子健; 丛汉卿; 党志国; 陈业渊; 《果树学报 》 2016 北大核心 CSCD

摘要：【目的】鉴定‘阿蒂莫耶’番荔枝花朵开放过程中挥发性化学成分的变化,并分析其香味特征。【方法】采用固相微萃取结合气相色谱/质谱法,检测其花发育过程中的挥发性化学成分及变化。【结果】在‘阿蒂莫耶’番荔枝花朵不同发育阶段共检出37种主要挥发性成分,包括醇类、醛类、酯类、酮类和萜烯类,其中,花朵半开期主要挥发性成分含量最高。萜烯类化合物在各个时期所占比例最高、种类最多,主要有蒎烯、月桂烯、罗勒烯等,并且萜烯类物质随着花朵开放,含量逐步上升。经对挥发性物质的香味进行分析,半开期和全开期花朵共涵盖18种香型,其中,松柏香、药草香、玫瑰香、铃兰花香、兰花香、木香、果香、青香荷载均较大,且两个阶段花朵香韵分布基本一致,可视为‘阿蒂莫耶’番荔枝花朵的主要香韵。【结论】幼花期与花瓣闭合期、半开期和全开期相比较,挥发性成分有较大不同;而花瓣闭合期、半开期和全开期3个时期挥发性成分种类基本一致。半开期主要挥发性成分含量较高,是花香精开发的最佳时期。此外,检出的芳樟醇、罗勒烯可以吸引授粉昆虫,为番荔枝人工辅助昆虫授粉提供了参考。

关键词： 番荔枝 ‘阿蒂莫耶’ 花朵 挥发性成分 香味特征 气相色谱/质谱

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橡胶树HAD家族蛋白酸性磷酸化酶基因VSP2的表达分析

李博勋; 陈奕鹏; 田维敏; 陈珊; 黄贵修; 《热带作物学报 》 2016 北大核心 CSCD

摘要：植物营养储藏蛋白VSP2是HAD家族蛋白(haloalcanoic acid dehalogenase super family,HAD)的主要成员之一。该蛋白具有酸性磷酸化酶的功能,在橡胶树氮素储存和植物凝集素防御胁迫中发挥着重要的作用。在前期研究中,利用c DNA-AFLP获得了1条与橡胶树棒孢霉落叶病抗病性相关的差异表达片段EST-IAN-24,通过Blast比对分析,发现该基因片段与其他物种的VSP2基因具有较高同源性。采用PCR和RT-PCR技术,克隆获得了一个橡胶树VSP2基因的c DNA和基因组序列,并将该基因命名为Hb VSP2。基因序列分析显示,该基因编码区全长(CDS)975 bp,含有4个内含子和5个外显子,编码324个氨基酸,推测该蛋白的分子质量为30.01 ku,等电点为4.80。该基因蛋白是HAD家族蛋白中的酸性磷酸酶,具有DXDXT基序特征。q RT-PCR定量分析发现,受多主棒孢病菌侵染后,Hb VSP2基因在橡胶树抗、感品种中的表达量存在着明显的差异,抗病品种(IAN873)的表达量显著高于感病品种(PR107),且在接种12 h达到了峰值;此外,该基因在水杨酸、茉莉酸甲酯、乙烯的处理下均能诱导其表达,对茉莉酸甲酯的敏感性明显高于其他2个激素。本研究初步表明,Hb VSP2基因可能参与橡胶树与多主棒孢病菌的互作并且与抗病性相关。

关键词： 橡胶树 HbVSP2基因 克隆 表达分析

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