科研产出
基于CRISPR/Cas9技术的水稻pi21基因编辑材料的创制及稻瘟病抗性鉴定
《分子植物育种 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：利用CRISPR-Cas9技术,对水稻稻瘟病感病品种日本晴pi21基因进行定点突变,获得了抗稻瘟病的pi21隐性突变株系。基因编辑载体T0转化植株的检测结果表明,86.7%的T0植株的pi21基因靶序列发生了碱基缺失。通过T-DNA序列的PCR检测,剔除携带T-DNA的T1植株,从23个T1株系筛选获得107个不含T-DNA转基因序列的植株。然后对pi21的编辑位点进行酶切和测序分析,获得了21株pi21纯合突变体。对1个pi21突变株系进行稻瘟病菌孢子喷雾接种,与未转化日本晴相比,突变株系显著抗病。对接种水稻样品的6个病程相关基因进行q RT-PCR分析,与感病日本晴比较,pi21突变株系在接种稻瘟病菌后,病程相关基因诱导表达的速度更快,表达量更高。本研究利用基因编辑技术,实现了对感稻瘟病水稻的定点突变并提高了其稻瘟病抗性水平,为利用该技术培育持久抗稻瘟病水稻品种奠定了研究基础。
关键词： pi21 CRISPR/Cas9 水稻稻瘟病抗性 病程相关基因 qRT-PCR
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采样方法对冷鲜鸡表面细菌DNA提取及高通量测序结果的影响
《食品科学 》 2017 EI 北大核心 CSCD
摘要：目的:比较涂抹法和冲洗法对冷鲜鸡表面细菌DNA提取及高通量测序结果的影响。方法:将4只冷鲜鸡对半分开,分别采用涂抹法和冲洗法采集其表面微生物,提取基因组DNA,对细菌16S rRNA基因V3~V4区进行聚合酶链式反应扩增,通过Illumina Hiseq测序平台对扩增产物进行高通量测序,使用QIIME等软件对测序序列进行分析统计。结果:两种方法采集的样品在细菌基因组DNA提取、菌群丰富度、多样性及菌群结构等方面均无显著差异(P>0.05)。高通量测序结果表明,冷鲜鸡表面细菌菌群主要分布于7个门,10个属。变形菌门为优势菌门,占70%以上;希瓦氏菌属、假单胞菌属、不动杆菌属、嗜冷杆菌属和环丝菌属为优势菌属,分别占10%~20%。结论:两种采样方法对冷鲜鸡表面细菌DNA提取及高通量测序没有明显影响,但冲洗法比涂抹法简单易行,且不易发生二次污染,因此更具有实用性。本实验同时也为冷鲜鸡表面细菌的研究提供了数据资料。
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荧光定量PCR技术在猪病毒病诊断上的应用思考
《畜牧兽医科学(电子版) 》 2017
摘要：荧光定量PCR技术是以PCR定性技术为基础发展起来的,是一种核酸定量新技术,是将荧光基团引入到PCR反应体系中,通过荧光信号对PCR进行全程的监控。在监控过程中,会得到相关的数据信息,根据标准曲线完成对未知模板的定量。荧光定量PCR技术可细分为多种方法,在动物检疫中有广泛的应用,尤其是在猪病毒诊断中发挥着重要的作用。本文对荧光定量PCR技术的原理及特点进行分析,并就其在猪病毒诊断上的应用进行探讨。
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重庆大巴山地区中蜂遗传多样性分析
《黑龙江畜牧兽医 》 2017 北大核心
摘要：为了保护大巴山地区的中蜂资源,试验采集重庆市城口县111只中蜂样本,采用线粒体DNA tRNAleu-COⅡ基因测序的方法对大巴山中蜂进行遗传多样性分析。结果表明:大巴山地区111只中蜂样本中共检测到单倍型21种,群体的单倍型多样度(Hd)为0.859 0,平均核苷酸差异数(K)为2.482,核苷酸多样度(Pi)为0.006 01,其中有5个单倍型属于首次发现的单倍型。说明大巴山地区中蜂的遗传多样性较高,具有独特的遗传背景,其开发潜力,尤其是保种和育种价值很大。
关键词： 大巴山 中蜂 遗传多样性 线粒体tRNAleu-COⅡ 保种价值 线粒体DNA
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鸭坦布苏病毒E蛋白线性化B细胞抗原表位的鉴定
《浙江农业学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：为鉴定鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)的B细胞抗原表位,以纯化的DTMUV YY5株为抗原制备了2株单克隆抗体AE4和BD10,研究证实BD10为线性化表位,其结合的抗原表位位于E蛋白的第三结构域(DomainⅢ,D_Ⅲ)。将DTMUV E蛋白D_Ⅲ结构域基因截短为具有末端相互重叠的15段,与MBP融合表达后以单克隆抗体BD10进行肽库扫描,结果筛选出DTMUV一个B细胞线性表位_(385)LVGSGKGQI_(393)(EP385)。该表位原核融合表达产物免疫小鼠制备的抗体,能够和DTMUV E蛋白反应,表明EP385表位具有良好的免疫原性,可为DTMUV多肽疫苗的研制及特异血清学诊断方法的开发奠定基础。
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