科研产出
双基因敲除减毒单增李斯特菌(ΔactA/ΔinlB)的构建及其生物学初步鉴定
《现代食品科技 》 2016 北大核心
摘要：减毒单增李斯特菌具有成为疫苗活载体的潜力,可同时引起MHCⅠ和MHCⅡ类抗原递呈系统,具有强烈激发CD8+和CD4+细胞免疫的能力。构建毒力基因缺失菌株进而评估其生物活性对于其作为疫苗活载体的开发尤为重要。本文采用同源重组技术构建单缺失菌株Lm-△act A和双缺失菌株Lm-△act A△/inl B,从生长状态、毒力基因表达和对Hep G2细胞侵袭能力方面探讨减毒菌株生物学特性。生长活性测定显示两种减毒菌株和野生型Lm(EGD-e)三者生长状况无差异;实时定量PCR结果显示act A基因缺失后,inl A基因表达水平上升两倍;act A和inl B基因双缺失后,plc B和hly基因的表达水平都有较大幅度的上升;侵袭Hep G2细胞结果显示act A基因缺失后侵袭能力增强、act A和inl B基因共同缺失后侵袭能力减弱。因此,减毒菌株的构建及其生物特性研究不仅对食源性致病菌Lm致病机理具有重要意义,也为构建预防人类和动物疫病的疫苗载体奠定了基础。
关键词： 减毒单增李斯特菌 疫苗载体 actA inlB 生物特性 细胞侵袭
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南美白对虾体表与肠道细菌菌群结构的DGGE分析
《中国食品学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：采用DGGE技术对南美白对虾体表与肠道的4个部位进行细菌菌群结构分析,结果表明:粪肠球菌和假单胞菌属是南美白对虾肠道细菌的主要成员;葡萄球菌属是体表的优势菌,尤其在腹部占据了绝对优势,包含3个菌种:表皮葡萄球菌、科氏葡萄球菌和巴氏葡萄球菌。不同部位的体表细菌存在差异,头胸部的葡萄球菌比腹部少,只有科氏葡萄球菌,而粪肠球菌与希瓦氏菌比腹部的多。头胸部有鳃,而腹部存在甲壳节与节的连接膜,这些生理结构的差异导致体表细菌菌群结构不同。DGGE图谱还揭示出一些常见的腐败菌分布是不同的,拟态弧菌和豚鼠气单胞菌只存在与肠道中,而希瓦氏菌属仅在体表被检测到。假单胞菌属的不同菌种在南美白对虾的体表与肠道有不同分布,DGGE甚至能检测到出现在体表与肠道的粪肠球菌的菌株不同。这些结果表明DGGE在菌株鉴定方面具有很高的灵敏性,有可能应用在腐败菌溯源方面。
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水稻OmR40c1蛋白的表达纯化及其与血红细胞的凝集作用
《生物技术通讯 》 2016
摘要：目的:在大肠杆菌中融合表达水稻蛋白Om R40c1,并探讨其与红细胞的凝集效果,为进一步研究Om R40c1在体外的抑菌实验做准备。方法:PCR扩增目的基因,经Bam HⅠ及NotⅠ双酶切,连入表达载体p GEX-6p-1构建成重组质粒,测序正确后转入大肠杆菌BL21,优化诱导表达条件;纯化重组Om R40c1蛋白,并分析其与红细胞的凝集效果。结果:获得原核表达的Om R40c1蛋白,重组Om R40c1在低温(4℃)条件下可与兔血红细胞发生凝集作用。结论:原核表达体系适合水稻Om R40c1蛋白的融合表达。
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油菜开花期QTL定位及与粒重的遗传关联性
《中国农业科学 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：【目的】明确中国和欧洲油菜开花期主控位点及其对粒重的影响,为早熟油菜品种选育提供科学依据。【方法】以欧洲冬油菜Sollux和中国品种高油605的选系(Gaoyou)杂交F1经小孢子培养产生的DH群体为材料,采用7年9种环境下的开花期表型数据和新版SG图谱定位开花期QTL,并采用条件遗传学和QTL分析相结合的条件QTL定位方法,解析开花期对千粒重QTL的影响,最后对各20个极端开花期株系的基因型和表现型进行性状-标记的符合度测定,为标记筛选用于辅助选育提供依据。【结果】应用WinQTLCart 2.5复合区间作图法,共检测到7个在3种以上环境中稳定表达的控制开花QTL,加性效应值在0.58—3.85 d,解释了表型总变异的84%。8对上位性QTL效应总和为加性总效应的41.8%。QTL与环境互作效应只在少数位点和个别环境中显著。在3个主效QTL峰值或相近位置上定位了4个在拟南芥中调控开花的关键基因FT、API、FLC和FY的6个同源拷贝,为发掘控制这些QTL的候选基因提供了有价值的参考信息。条件QTL分析表明,在4个增重效应均来自Gaoyou的千粒重QTL位点(qSWA2、qSWA3、qSWA4和qSWC2),大粒等位基因效应可能与开花早、籽粒灌浆期长有关。通过选择这些位点的早开花标记基因型有望同时提高种子千粒重,这也部分给出了开花期与千粒重之间极显著负相关的遗传解释,但2个粒重主效位点(qSWA7和qSWC8)的遗传效应不受开花期影响。根据SG群体极端开花期株系在3个效应值最大的QTL(qFTA2、qFTC2和qFTC6)区域标记基因型和开花期表现型的关联分析,筛选获得6个高质量、高吻合度的共显性标记推荐育种应用。qFTA2位点,标记辅助准确率为70%-80%;qFTC2和qFTC6位点的选择效率达到80%-100%。基因型组配分析显示,聚合qFTA2、qFTC2和qFTC6的早开花等位基因,可显著提早开花期,同步增加千粒重但不影响含油量和角果粒数。【结论】7个QTL均显示早开花等位基因来自中国亲本。拟南芥中调控开花关键基因FT、API、FLC和FY的6个同源拷贝定位到3个主效QTL峰值位置。开花迟、早显著影响4个千粒重QTL位点,但2个最重要的粒重位点(qSWA7和qSWC8)不受影响;3个主效QTL(qFTA2、qFTC2和qFTC6)的6个共显性标记可用于早熟基因的转育和早熟材料的筛选。
关键词： 甘蓝型油菜 QTL定位 开花期 千粒重 条件QTL定位
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利用微卫星标记检测仙居鸡保种效果
《中国家禽 》 2016 北大核心
摘要：研究利用28对微卫星标记检测仙居鸡第九和第十世代两个保种群体的遗传结构,通过2个世代间的遗传差异分析仙居鸡的保种效果。结果,2个世代28个位点共检测到172个等位基因,其中7个为0世代所特有,2个世代各座位平均等位基因数为5.5和5.9个,10世代等位基因数有所上升,但差异不显著(P<0.05);2个世代选取的28个微卫星位点的平均多态信息含量(PIC)分别为0.5828和0.5856,平均期望杂合度(He)分别为0.6165和0.6174,2个世代间均无显著差异(P<0.05);2个世代间相似性系数为0.9735,Nei氏遗传距离为0.0269,表明2个世代间群体遗传结构相似性很高;经检验,9世代存在11个不平衡位点,10世代存在13个不平衡位点,表明哈代-温伯格平衡趋于下降趋势。研究结果表明仙居鸡采用家系等量留种轮回交配法进行保种可行,但要注意避免群体遗传结构处于不平衡状态。
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杀草胺在稻谷和糙米中的残留检测方法
《农药 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：[目的]建立杀草胺在稻谷和糙米中的高效液相色谱残留检测方法。[方法]样品经石油醚提取,弗罗里硅土玻璃层析柱净化;Agilent-1260高效液相色谱仪配备紫外检测器检测。[结果]该方法在稻谷和糙米中的添加质量分数均为0.0715、0.715、2.86 mg/kg时,回收率为80.00%~102.51%,RSD为0.57%~5.55%。在稻谷和糙米中的最低检测质量分数为0.0715 mg/kg,最小检出量为7.0×10-11g。[结论]所建立检测方法的灵敏度、准确度和精密度均满足杀草胺在糙米和稻谷中残留分析要求。
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雪菜酶解过程中降解酶复配条件优化
《中国食品学报 》 2016 EI 北大核心 CSCD
摘要：为提高雪菜加工副产物的利用率,利用酶复配技术降解雪菜粗纤维及大颗粒物质,并对该工艺进行优化。试验结果表明,果胶酶、β-葡聚糖酶和纤维素酶复配能有效裂解雪菜细胞壁,有利于细胞内物质的溶出。经单因素和响应曲面优化,得出3种酶复配的最佳用量为果胶酶200 U/g、β-葡聚糖酶30 U/g、纤维素酶200 U/g。在45℃恒温处理36 h,大颗粒物质降解率为70.16%,粗纤维降解率可达66.67%,亚硝酸盐含量下降61.3%,还原糖含量比对照组高28.70倍。经复合酶处理能显著增加雪菜中游离氨基酸含量,尤其是天门冬氨酸和谷氨酸,在一定程度上改善了雪菜的风味。
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猪胰高血糖素样肽2及其长效化物在大鼠体内的药代动力学研究
《动物营养学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：本试验旨在研究猪胰高血糖素样肽-2(p[Gly2]GLP-2)、聚乙二醇修饰猪胰高血糖素样肽2(PEG-p[Gly2]GLP-2)和p[Gly2]GLP-2微球在大鼠体内的药代动力学过程,为利用p[Gly2]GLP-2修复断奶仔猪肠道损伤提供参考依据。选取18只280 g左右的雄性SD大鼠,随机分为3组,分别单次皮下注射p[Gly2]GLP-2(5.64 nmol/kg)、PEG-p[Gly2]GLP-2(5.64 nmol/kg)和p[Gly2]GLP-2微球(15 mg/只),定点采血后,酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定胰高血糖素样肽-2(GLP-2)的血药浓度。结果表明:1)PEG-p[Gly2]GLP-2的半衰期(t1/2)是p[Gly2]GLP-2的4倍,血药浓度-时间曲线下面积(AUC0-t)和平均滞留时间(MRT0-t)是p[Gly2]GLP-2的3倍,清除率(CL)是p[Gly2]GLP-2的1/2,两者的达峰浓度(Cm ax)相差不大,PEG-p[Gly2]GLP-2的达峰时间(Tm ax)滞后于p[Gly2]GLP-2。2)p[Gly2]GLP-2微球的达峰时间与p[Gly2]GLP-2、PEG-p[Gly2]GLP-2相差不大,但半衰期为(72.20±6.02)h,平均滞留时间为(90.66±7.41)h。结果提示,经聚乙二醇(PEG)修饰后p[Gly2]GLP-2的药代动力学行为发生了很大的改变,半衰期延长、达峰时间滞后、平均滞留时间延长、血浆清除减慢、生物利用度更高;p[Gly2]GLP-2微球半衰期更长,且持续稳定的释放,操作便利。
关键词： p[Gly2]GLP-2 PEG-p[Gly2]GLP-2 p[Gly2]GLP-2微球 药代动力学 大鼠
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江苏省稻米镉含量调查及其膳食暴露评估
《农业环境科学学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：为评价江苏省稻米重金属镉污染现状,于2013年在全省13市调研抽检了1101份稻谷,采用石墨炉原子吸收光谱法测定稻米中的镉含量。检测结果显示,全省稻米镉的检出率为97.6%,平均含量为0.036 4 mg·kg~(-1),检出范围是0.000 3~0.431 0 mg·kg~(-1),仅有0.27%的样本超出0.2 mg·kg~(-1)的限量。整合我国居民20个性别年龄组人群的稻米消费和体重信息,采用非参数概率模型对稻米镉的膳食暴露量进行评估,并与JECFA推荐的镉的暂定每月耐受摄入量(PTMI)25μg·kg~(-1)体重相比,评估结果表明,我国居民食用江苏地区稻米产生的平均镉暴露风险尚可接受,但在P95的风险水平下,14岁以下人群的摄入量相对较高,占PTMI的86.3%~130.7%,其中11岁以下人群中有6.8%~9.0%的个体摄入量超过PTMI,潜在风险较大。建议对稻米中的重金属镉进行持续监测。
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