端粒逆转录酶基因(TERT)修饰对蒙古羊输卵管上皮细胞体外增殖能力的影响

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘洋

作者： 刘洋;海勒思;刘永斌;刘春霞;曹俊伟;张焱如

作者机构：

关键词： 端粒逆转录酶(TERT);蒙古羊输卵管上皮细胞(SOECs);体外增殖;脂质体法

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2022 年 30 卷 004 期

页码： 686-694

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 输卵管上皮细胞(oviduct epithelial cells,OECs)能够提供理想的生理生化环境、支持胚胎发育,但其体外增殖能力较弱,无法满足实验研究与应用需求.本研究将外源性端粒逆转录酶基因(telomerase reverse transcriptase,TERT)转入蒙古羊(Ovis aries)输卵管上皮细胞(sheep OCEs,SOECs)并观察TERT基因修饰的蒙古羊输卵管上皮细胞(TERT-SOECs)的体外增殖能力.首先经酶消化法建立了SOECs系,将重组质粒pCI-neo-TERT以脂质体法转染至原代SOECs;经G418抗性筛选,得到稳定表达TERT基因的SOECs,qPCR检测了TERT基因在细胞中的表达;免疫荧光法检测上皮细胞特异性标志物角蛋白18(cytokeratin18,CK18)并对TERT-SOECs进行生长曲线拟合和活性测定.结果显示,成功将TERT基因导入了SOECs,PCR检测表明细胞表达了276 bp的TERT基因片段,TERT基因表达量极显著高于未转染和转染pCI-neo空载体的SOECs(P<0.001);转染后的细胞仍保留了SOECs的生物学特性,P5 TERT-SOECs倍增时间为46.61 h,而P5 SEOCs倍增时间为65.03 h,TERT-SOECs体外增殖速度明显高于SOECs.综上,本研究成功建立了有较强体外增殖能力的TERT-SOECs系,为种质资源细胞库提供了种子细胞.

分类号： S826.8+2

  • 相关文献
作者其他论文 更多>>

微信小程序