基于S蛋白的犬冠状病毒间接ELISA检测方法的建立与应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 曹海旭

作者： 曹海旭;胡博;李虹晔;李昀真;代昕宇;张成琪;李双双;张海玲;廉士珍;白雪

作者机构：

关键词： 犬冠状病毒;S蛋白;原核表达;ELISA

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2022 年 52 卷 005 期

页码： 564-571

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 旨在原核表达犬冠状病毒(CCoV)的刺突(S)蛋白,以此为包被抗原,通过优化条件建立CCoV血清抗体间接ELISA检测方法.首先,将CCoV的S基因序列克隆至原核表达载体pCold Ⅰ中,在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达.Western-blot验证蛋白大小约为28 ku,纯化后作为包被抗原,通过优化条件建立检测CCoV抗体的间接ELISA,抗原包被最佳质量浓度为4 μg/mL;待检血清稀释度为1 ∶160时D450最高;酶标抗体最佳稀释度为1∶3 000;TMB最佳显色时间为20 min;最佳封闭液为50 g/L脱脂奶粉溶液;阴阳性临界值为D450=0.214;与犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬腺病毒的阳性血清均不发生交叉反应,表明特异性好;批内变异系数最大值为4.531%,批间变异系数最大值为2.908%,表明重复性好;该方法能检测到640倍稀释的血清,表明敏感性较高.应用该方法对161份临床犬血清进行检测,发现阳性率为98.7%,说明CCoV的感染率较高.本研究为CCoV抗体检测提供了有效工具.

分类号： S852.659.6

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