产气荚膜梭菌β1毒素蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张广林

作者： 张广林;徐龙;高云艳;李玲霞;刘永生;尚佑军;曹小安

作者机构：

关键词： 产气荚膜梭菌;β1毒素蛋白;ELISA

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN：

年卷期： 2021 年 010 期

页码： 1207-1214

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立产气荚膜梭菌β1毒素抗体间接ELISA检测方法,从C型产气荚膜梭菌扩增出编码β1毒素蛋白的基因,将其克隆至原核表达载体pET30a后,转入表达宿主菌BL21中,用IPTG诱导表达的包涵体蛋白经Ni柱纯化后,用不同浓度的尿素溶液进行复性处理。用不同浓度的重组蛋白包被酶标板,控制变量法对ELISA各步反应条件和血清、酶标二抗的稀释度进行优化。结果表明,纯化后的重组蛋白的纯度可达93%,且具有较好的反应原性,重组蛋白的最适包被浓度为1μg/m L、4℃过夜包被,山羊血清按照1∶300稀释,37℃反应15 min,家兔抗山羊酶标抗体按照1∶50 000稀释,37℃反应60 min时效果最好。对30份阴性血清的检测结果进行统计学分析,确定其临界判定值,即D450≥0.335 7为阳性,D450<0.335 7为阴性;并用相应的血清检验了该方法的敏感性、特异性和重复性。用此方法检测西北地区部分羊场的500份血清样品,其中有473份β1毒素抗体呈阳性,检出率为87.4%。此方法的建立为产气荚膜梭菌β1毒素抗体检测试剂盒的研发奠定了基础。

分类号： S852.61

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