鸡SP-A在293T细胞中的表达及免疫学检测

文献类型： 中文期刊

第一作者： 黄琪

作者： 黄琪;汪凯;涂健;潘玲;祁克宗;李泽君;陈鸿军;刘红梅

作者机构：

关键词： 鸡肺表面活性蛋白A;真核表达;检测

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2016 年 05 期

页码： 63-68

收录情况： 北大核心

摘要： 为表达鸡肺表面活性蛋白A(chicken palmonary surfactant protein A,c SP-A)基因,本研究扩增去除终止子的c SP-A,通过Nhe I和Apa I双酶切,连接进入真核表达载体pc DNA3.1/myc-His(-)A中,构建获得重组载体pc SP-A;同时,将c SP-A和gfp基因按Nhe I-Bam H I和Bam H I-Apa I分别连接至pc DNA3.1/myc-His(-)A载体中,构建获得融合表达载体pc SP-A-GFP。通过脂质体法将这两类真核载体瞬时转染293T细胞,48 h后用4%多聚甲醛固定细胞,利用c SP-A特异性鼠多抗进行间接免疫荧光,于倒置荧光显微镜下观察c SP-A表达和亚细胞定位情况,然后收获细胞进行Western blot检测。结果发现,c SP-A在细胞质中表达,pc SP-A和pc SP-A-GFP融合蛋白的相对分子量分别约为30 k Da和55 k Da。上述研究结果为进一步研究c SP-A的功能奠定了基础。

分类号： S858.31

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