同源重组敲除MSTN基因的猪胎儿成纤维细胞的构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李景芬

作者： 李景芬;于浩;袁野;刘娣

作者机构：

关键词： 猪;胎儿成纤维细胞;基因打靶;肌肉生长抑制素

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2009 年 42 卷 08 期

页码： 2972-2977

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】获得敲除肌肉生长抑制素(MSTN)基因的猪胎儿成纤维细胞。【方法】打靶载体的构建:以Neo为正筛选基因、HSV-tk为负筛选基因。在Neo的两侧分别插入同源长臂和同源短臂。同源长臂5382bp,包含MSTN基因的部分5′端,全部的exon1,intron1和exon2及大部分intron2;同源短臂844bp,包含部分exon3及3′端的部分序列。取35d胎龄的大白猪,用胰酶消化法,分离胎儿成纤维细胞并对其进行培养和建系。采用脂质体法将打靶载体导入胎儿成纤维细胞中,转染后的细胞采用250μg·ml-1G418筛选7d,再用200μg·ml-1G418+2μmol·L-1GANC维持筛选。用RT-PCR法检测转染前转染后细胞MSTN基因表达量。【结果】成功构建了对猪MSTN基因部分intron2和exon3区域进行敲除的替代型打靶载体。共得到5个具有药物抗性的细胞克隆,经PCR检测,其中一个细胞克隆发生了正确的同源重组。转染后细胞MSTN基因表达量明显降低。【结论】获得了敲除MSTN基因的猪胎儿成纤维细胞。

分类号： S828

  • 相关文献

[1]体细胞克隆制备肌肉生长抑制素(Myostatin)基因敲除猪. 李鸿辉,冯冲,王宁,闫军,龙川,郑道山,李西睿,罗学明,朱彦宾,潘登科. 2010

[2]体细胞核移植生产转ω-3脂肪酸去饱和酶基因(sFat-1)的猪胚胎. 冯冲,周艳荣,龙川,刘晓,陈红星,潘登科,杨博辉. 2009

[3]电穿孔法转染猪胎儿成纤维细胞条件优化. 张庆晓,王慧利,孟春花,王锋,曹少先. 2012

[4]猪肌肉生长抑制素RNA干涉载体的构建与验证. 于永生,罗晓彤,李娜,张树敏. 2012

[5]猪肌肉生长抑制素(MSTN)前肽定点突变载体的构建及其原核表达. 姜声旺,张晓玮,王在贵,崔文涛,李奎. 2012

[6]福建白兔胎儿成纤维细胞分离培养和鉴定. 陈冬金,王锦祥,孙世坤,陈岩锋,桑雷,谢喜平. 2020

[7]利用启动子缺陷型打靶载体敲除五指山小型猪GGTA1基因. 郑道山,冯冲,朱彦宾,龙川,冯书堂,潘登科,马文丽. 2011

[8]猪圆环病毒2型orf2基因在奶山羊胎儿成纤维细胞中的表达与生物活性鉴定. 高珊,申培磊,侯书宝,徐洪龙,卢清侠,张勇,张改平. 2017

[9]转K2.9基因绒山羊体细胞核移植技术体系的优化研究. 潘晓燕,于永生,刘晓辉,王正朝,王晓阳,朴庆林,张立春,金海国. 2012

[10]绵羊胎儿成纤维细胞不同处理对核移植重构胚发育的影响. 王海,敖红,潘求真,李荣旗,赵孟彬,连正兴,李宁,吴常信. 2006

[11]脊尾白虾MSTN基因组织及不同蜕皮后时间点的表达特征. 薛蓓,张培,李志辉,赵莲,邰小飞,徐晔,赖晓芳,高焕,阎斌伦. 2016

[12]利用反义寡核苷酸技术抑制MSTN基因表达的研究. 胡兰,王娜,吴丹. 2007

[13]锌指核酸酶技术制备肌肉生长抑制素基因敲除的五指山小型猪成纤维细胞. 曹随忠,岳成鹤,李西睿,冯冲,龙川,潘登科. 2013

[14]大口黑鲈肌肉生长抑制素基因单核苷酸多态性位点的筛选及其与生长性状关联性分析. 于凌云,白俊杰,樊佳佳,李小慧,叶星. 2010

[15]MSTN基因外显子3的多态性及其与边鸡生长性状的关联分析. 张跟喜,丁馥香,赵秀华,王金玉,金崇富,张丽. 2011

[16]肌肉生长抑制素基因(MSTN)外显子1的多态性及其与边鸡生长性状的关联分析. 张跟喜,丁馥香,是燕萍,王金玉,张李俊,张丽,施会强. 2011

[17]澳洲白绵羊美丽臀和肌肉生长抑制素基因基因型的检测. 张淑珍,张莉,赵福平,王慧华,刘瑞凿,刘真,樊红樱,魏彩虹,杜立新. 2014

[18]牙鲆肌肉生长抑制素(MSTN)基因克隆. 徐建勇,陈松林. 2008

[19]肌肉生长抑制素基因在重要经济动物育种中的研究进展. 杨鹏,黄涛,徐梦思. 2023

[20]CRISPR/Cas9技术制备猪肌肉生长抑制素基因敲除细胞. 华文君,毕延震,刘西梅,张立苹,肖红卫,郑新民,华再东,任红艳. 2015

作者其他论文 更多>>

微信小程序