利用CRISPR/Cas9技术构建RAG1基因敲除免疫缺陷猪模型的研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王清未

作者： 王清未;李振阳;张效生;张林林

作者机构：

关键词： 免疫缺陷动物;CRISPR/Cas9;猪;RAG1;sgRNA

期刊名称： 黑龙江畜牧兽医

ISSN： 1004-7034

年卷期： 2024 年 009 期

页码： 1-7,114-115

收录情况： 北大核心

摘要： 为了利用显微注射一步法构建RAG1基因敲除的免疫缺陷猪模型，试验利用CRISPR/Cas9技术针对猪的RAG1基因设计并筛选出高效的sgRNA，与体外转录的Cas9 mRNA按照4∶6比例混合后显微注射到猪体外受精的受精卵中，随后将基因编辑的受精卵移植到受体母猪输卵管内;仔猪出生后采集耳缘皮肤组织提取基因组进行PCR扩增、T7核酸内切酶Ⅰ酶切鉴定，以及利用Sanger法测序鉴定编辑后基因型;监测基因敲除的免疫缺陷仔猪在普通环境的生存周期;对死亡的仔猪进行剖检，采集胸腺和脾脏等免疫器官进行组织学分析。结果表明:通过在猪成纤维细胞系水平上进行RAG1基因敲除效率的筛选，筛选出针对猪RAG1基因第2外显子高效敲除的sgRNA序列，通过对猪受精卵胞质显微注射sgRNA和Cas9 mRNA混合物，获得2头RAG1基因敲除免疫缺陷仔猪，经鉴定发现RAG1基因的第2外显子碱基序列中有1 bp插入，造成移码突变，破坏了RAG1基因功能，致使仔猪免疫系统缺陷。出生的2头免疫缺陷仔猪在普通饲养环境的存活时间分别为19 d和33 d。RAG1基因敲除的免疫缺陷仔猪胸腺缺失，脾脏发育不良，无法在正常饲养环境中长时间存活。脾脏结构紊乱，出现炎症细胞浸润等免疫系统异常。说明通过CRISPR/Cas9技术进行显微注射可获得RAG1基因敲除的免疫缺陷猪模型。

分类号： R593.3%R-332

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