乙型流感病毒TaqMan荧光定量PCR分型检测方法的建立及初步应用

文献类型: 中文期刊

第一作者: 赵文欣

作者: 赵文欣;朱翔宇;肖妍;韩继成;哈卓;张赫;谢宇飚;鲁会军;金宁一

作者机构:

关键词: 乙型流感病毒;TaqMan荧光定量PCR;血凝素

期刊名称: 中国兽医学报

ISSN: 1005-4545

年卷期: 2024 年 004 期

页码: 685-691

收录情况: 北大核心 ; CSCD

摘要: 通过比对GISAID登录的乙型流感病毒Victoria谱系、Yamagata谱系HA基因序列,选择保守区域设计并合成1对引物及2条荧光探针,以实验室保存的乙型流感毒株RNA为模板分别扩增Victoria谱系和Yamagata谱系HA基因片段,构建重组质粒标准品pUC57-Vic和pUC57-Yama,经PCR及测序鉴定正确后作为质粒标准品,初步建立乙型流感病毒的TaqMan荧光定量PCR(real-time quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)分型检测方法。结果显示,该方法可以特异的鉴别检测乙型流感Victoria谱系、Yamagata谱系病毒RNA,对甲型流感病毒、EB病毒、腺病毒等RNA/DNA的检测结果均为阴性;对重组质粒标准品的检测限分别为333、2 940拷贝/μL;批内与批间的重复性试验的变异系数均小于2%,表明所建立的检测方法特异性良好、灵敏度较高、重复性好;利用该方法与常规反转录PCR(RT-PCR)方法对10份流感样病例咽拭子进行检测,检测结果一致(3/10)。结果表明,本试验建立的乙型流感病毒TaqMan荧光定量PCR分型检测方法能够检测乙型流感病毒,为乙型流感病毒Victoria谱系及Yamagata谱系的鉴别提供更加快速准确的定量检测手段。

分类号: S852.65

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