非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 吕璐

作者： 吕璐;钟秋萍;于婉琪;谢振华;张萌;刘英楠;叶建强;秦爱建;扈荣良;陈宗艳;陈鸿军

作者机构： 中国农业科学院上海兽医研究所;扬州大学兽医学院;军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所

关键词： 非洲猪瘟病毒;p30蛋白;单克隆抗体;免疫特性

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2022 年 30 卷 003 期

页码： 158-165

收录情况： 北大核心

摘要： 本研究参考非洲猪瘟病毒(ASFV)国内分离株SY18株的CP204L基因(编码p30蛋白),进行人源偏嗜性密码子优化,并分别构建表达载体pET-32a-p30和pCMV-2 xFlag-p30.利用原核表达系统获得pET-32a-p30重组蛋白,并以该融合蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠制备了抗ASFVp30蛋白的单克隆抗体.SDS-PAGE分析发现,在16℃、1 mmol/L IPTG条件下诱导6 h后,该p30重组蛋白主要表达在包涵体中且表达量中等,蛋白分子量约为48 kDa.通过酶联免疫吸附实验(ELISA)、蛋白印迹法(Western blot)和间接免疫荧光法(IFA)检测获得的单克隆抗体3C2和4A3.结果显示,两株单克隆抗体均具有良好的免疫特性,且3C2株具有Western blot效价.本研究中p30原核重组蛋白及其单克隆抗体的制备为进一步探究p30磷酸化修饰及功能解析奠定基础,并为ASFV特异性诊断技术提供了必要的生物材料.

分类号： S852.651

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