呼吸道合胞病毒NS2蛋白单克隆抗体的制备及初步研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王亚娟

作者： 王亚娟;陈娇;陈志华;茹毅;郑海学;裴晶晶

作者机构： 兰州理工大学生命科学与工程学院;中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室

关键词： 呼吸道合胞病毒;NS2蛋白;原核表达;单克隆抗体

期刊名称： 病毒学报

ISSN： 1000-8721

年卷期： 2024 年 002 期

页码： 302-313

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 呼吸道合胞病毒（Respiratory syncytial virus,RSV）是一种引起婴幼儿下呼吸道感染的RNA病毒，其非结构蛋白（Nonstructural protein 2,NS2）在病毒复制和宿主抗病毒免疫中起到关键作用，但目前尚无商品化NS2单克隆抗体。本研究选取NS2基因，经密码子优化后构建重组质粒pET-32a-NS2。将该重组质粒转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，经16℃诱导表达后，对表达蛋白进行SDS-PAGE鉴定。应用亲和层析技术纯化重组蛋白，将纯化的蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体，并将该单克隆抗体用于Western blot分析、免疫荧光检测和免疫沉淀反应。结果表明，诱导后的重组蛋白为可溶性表达，并经纯化后得到高纯度的NS2蛋白；纯化的NS2蛋白免疫小鼠后，获得了一株特异性强、反应性好的RSV NS2单克隆抗体4A4 2B2，其亚型为IgG1，且抗体效价可达1∶1024000；使用该单克隆抗体鉴定出RSV NS2蛋白在转染和感染细胞中正常表达，且NS2主要分布在细胞质中，在细胞核周围形成点状聚集体；在免疫沉淀反应中，该单克隆抗体作为捕获抗体能够特异性结合细胞中表达的NS2蛋白，为NS2蛋白的功能研究奠定了基础。

分类号： R373.1

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