番茄环纹斑点病毒Gn蛋白的原核表达及多抗血清制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 郑宽瑜

作者： 郑宽瑜;尚卫娜;张洁;郑雪;董家红

作者机构：

关键词： 番茄环纹斑点病毒;Gn蛋白;原核表达;抗血清

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2017 年 09 期

页码： 179-183

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 通过生物信息学预测,番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot virus,TZSV)Gn蛋白为跨膜蛋白,有3个跨膜结构域,抗原表位预测发现非跨膜区包含有较高的抗原指数区域,因此选择Gn蛋白的非跨膜区进行原核表达及多抗血清制备。用特异性引物,通过RT-PCR从感染TZSV的番茄中扩增出部分Gn基因片段,将获得的片段构建到原核表达载体pET-30a中,获得原核表达载体pET-30a-Gn,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳分析显示,高效诱导表达了40 kD融合蛋白。用回收纯化的融合蛋白免疫家兔,获得多抗血清。间接ELISA测定多抗血清的效价为1/16 384。利用制备好的抗血清对感染TZSV的病样进行Western blotting检测,能检测到特异性条带。结果表明该抗血清特异性良好,可用于TZSV Gn相关的免疫反应实验。

分类号： S432.41

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