弓形虫表面抗原SAG1截短型片段在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 安立刚

作者： 安立刚;蒋蔚;王权;陈永军;龚国华;周锦萍;邢小勇;孙泉云;丁铲

作者机构：

关键词： 弓形虫;tSAG1;蛋白表达;蛋白纯化;免疫印迹;ELISA

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2009 年 0 卷 10 期

页码： 136-141

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 在大肠杆菌中高效表达及纯化获得可溶性、有反应活性的弓形虫表面抗原SAG1截短型片段(tSAG1),为研制新型的弓形虫病检测试剂奠定基础。构建重组质粒pET-32a-tSAG1并将其转化大肠埃希菌BL21(DE3)表达菌株,在异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导下表达蛋白。SDS-PAGE分析表达产物的表达形式,通过降低培养温度、降低摇床转数和升高LB液体培养基pH,诱导目的蛋白在上清中表达,利用His.Bind Kit试剂盒对目的蛋白进行纯化,Western blot和ELISA检测纯化蛋白的反应原性。在IPTG为1mmol/L、温度37℃条件下,tSAG1以融合蛋白(His-tSAG1)的形式在大肠埃希菌中高效表达,表达产物以包涵体形式存在。在22℃和LB培养基pH为7.7条件下,融合蛋白主要在上清中表达。Western blot和ELISA分析纯化蛋白能被弓形虫的阳性血清所识别。tSAG1在大肠埃希菌中得到了可溶性蛋白表达,经纯化后能被弓形虫的阳性血清所识别,可用于制备检测弓形虫病的诊断试剂。

分类号： Q78

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