新型鸭呼肠孤病毒一步法TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 云涛

作者： 云涛;华炯钢;叶伟成;倪征;陈柳;张存

作者机构：

关键词： 新型鸭呼肠孤病毒;MGB探针;荧光定量RT-PCR;检测方法

期刊名称： 浙江农业学报

ISSN： 1004-1524

年卷期： 2020 年 004 期

页码： 571-576

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立一种快速、敏感和特异性检测新型鸭呼肠孤病毒(novel duck reovirus,NDRV)的方法,本研究根据GenBank数据库中NDRV S3基因保守序列设计1对特异性引物和1条MGB荧光探针,建立了一种检测NDRV的一步法MGB荧光定量RT-PCR方法,对其特异性、敏感性和重复性进行检验,并与普通RT-PCR进行比较.结果显示,扩增标准曲线相关系数为0.999,扩增产物的熔解曲线仅出现单特异峰.该方法对经典鸭呼肠孤病毒、H9N2禽流感病毒、鸭坦布苏病毒、A型鸭肝炎病毒、鸭新城疫病毒、鸭瘟病毒及番鸭细小病毒均未检测到信号,对NDRV的最小检出量为10拷贝·μL-1.组内和组间变异系数均小于2%,重复性好.此外,利用该方法对239份疑似新型呼肠孤病毒病样品进行检测,常规RT-PCR检测时有75份为阳性,一步法TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR方法检测时有100份为阳性,而且常规RT-PCR检测出的阳性样品用一步法TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR检测时均为阳性,符合率为100%.该检测方法的建立为NDRV早期快速检测及定量分析提供新的方法.

分类号： S852.65

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