利用启动子缺陷型打靶载体敲除五指山小型猪GGTA1基因

文献类型： 中文期刊

第一作者： 郑道山

作者： 郑道山;冯冲;朱彦宾;龙川;冯书堂;潘登科;马文丽

作者机构：

关键词： 五指山小型猪;基因敲除;GGTA1基因;胎儿成纤维细胞

期刊名称： 生物技术通讯

ISSN： 1009-0002

年卷期： 2011 年 22 卷 04 期

页码： 458-462

摘要： 目的:获得α-1,3-半乳糖基转移酶(GGTA1)基因敲除的五指山小型猪胎儿,为异种器官移植研究提供基础平台。方法:以新霉素磷酸转移酶基因(neo)为筛选标记基因构建启动子缺陷型打靶载体,打靶载体线性化后用电转染法将其导入胎儿成纤维细胞中,转染后的细胞经G418筛选后,用PCR法检测药物抗性的细胞克隆,对阳性细胞进行核移植构建重构胚胎及胚胎移植。结果:转染后,经筛选共得到176个具有G418抗性的细胞克隆,经PCR检测,其中2个细胞克隆发生了同源重组;以其中1个GGTA1+/-细胞克隆为供体细胞进行核移植,将重构胚移植到2头自然发情的受体母猪中,1头受体妊娠;第37 d将代孕母猪处死,获得2个胎儿,经PCR和Southern印迹鉴定,均为GGTA1单等位基因敲除胎儿。结论:构建了五指山小型猪GGTA1基因部分外显子4区域敲除的启动子缺陷型打靶载体,获得了GGTA1单等位基因敲除的胎儿,为培育GGTA1基因敲除的五指山小型猪奠定了基础。

分类号： Q78`S828

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