从富集液中发掘麻类脱胶果胶酶基因的技术

文献类型： 中文期刊

第一作者： 段盛文

作者： 段盛文;刘正初;郑科;冯湘沅;成莉凤;郑霞

作者机构：

关键词： 麻类脱胶;果胶酶基因;富集液

期刊名称： 中国生物工程杂志

ISSN： 1671-8135

年卷期： 2014 年 34 卷 01 期

页码： 86-89

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了突破传统可培养技术筛选麻类脱胶用果胶酶基因的不足,通过设计不同总DNA提取方法、样品富集方法以及优化PCR反应体系,建立起了一套适合于直接从富集液中发掘麻类脱胶用果胶酶基因的技术。结果表明,震荡培养脱胶时间比静止培养脱胶时间缩短51.5%;通过PowerSoilTMDNA Isolation Kit从第4次富集后的震荡发酵中能提取适合的总DNA;PCR最优反应体系为:总体积为25 ml,Mg2+浓度为2.0 mmol/L,dNTPs浓度为0.2 ng/μl,引物浓度为0.6μmol/L,DNA模板取2.5 ng/μl,Taq聚合酶量为0.8 U。获得的基因序列与已报道的果胶酶基因FJ538208序列高度相似,应用该技术成功地从麻类脱胶富集液中克隆到了果胶酶基因。

分类号： Q943

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