耐药基因blaTEM-1、blaIMP-3、fosA3多重重组聚合酶扩增(RPA)快速检测方法的建立和应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 朱凝瑜

作者： 朱凝瑜;贺泽;梁倩蓉;郑晓叶;丁雪燕;曲道峰

作者机构： 浙江省水产技术推广总站;浙江工商大学食品与生物工程学院浙江省食品安全重点实验室

关键词： 多重重组酶聚合酶扩增;快速检测;耐药基因

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2022 年 005 期

页码： 956-961

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了建立同时检测多种耐药基因的快速检测方法，本研究以blaTEM-1、blaIMP-3、fosA3基因保守序列设计特异性引物，经优化反应条件，建立恒温检测上述3种耐药基因的多重重组聚合酶扩增（RPA）方法。条件优化结果显示，所建立的RPA方法在引物浓度为480 mmol/L,37℃恒温反应20 min时检测效果最佳。该方法对携带blaTEM-1、blaIMP-3、fosA3基因的菌株能扩增出条带，阴性菌株无条带，特异性高；对blaTEM-1、blaIMP-3基因的最低检出限为1.8×10~1拷贝/μL,对fosA3基因的最低检出限为1.8×10~2拷贝/μL,敏感性较强。用多重RPA方法对浙江省内水产养殖环境及生物体中分离到的400株菌株进行检测，养殖用水分离菌株的blaTEM-1、blaIMP-3和fosA3检出率分别为81.00%（81/100）,11.00%（11/100）和29.00%（29/100）;水产动物体内分离菌株的blaTEM-1、blaIMP-3和fosA3检出率分别为73.67%（221/300）,1.33%（4/300）和23.33%（70/300）,与常规PCR基本一致。建立的RPA方法操作简单、反应快速、检测限低、结果可靠，适用于多种耐药基因的快速检测，为快速摸清养殖产业链各环节的耐药基因谱，减少耐药基因传播，保障食品安全提供了技术支撑。

分类号： S852.61

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