禽流感病毒PB2亚单位抗血清的制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 葛叶

作者： 葛叶;邓国华;李雪平;陈化兰

作者机构：

关键词： 流感病毒PB2;抗血清;原核表达;真核表达

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2010 年 30 卷 06 期

页码： 717-720

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 采用RT-PCR方法分段扩增PB2基因,将目的基因定向克隆至含HisTAG的原核表达载体pET-32a,经序列验证正确后,转化BL21大肠杆菌,诱导表达重组蛋白。靶蛋白经Ni+柱纯化后与弗氏免疫佐剂混合免疫新西兰大耳白兔,获得高效价的抗PB2的抗血清。Western-blot检测结果证实制备的抗血清可与PB2蛋白发生特异性反应。进一步将PB2全长基因准确插入真核表达载体pCAGGS,转染293T细胞表达PB2蛋白,通过IFA检测发现,抗血清与细胞表达的PB2蛋白发生反应,出现特异性荧光,经激光共聚焦检测PB2亚单位只在细胞核中出现荧光,说明PB2亚单位单独表达仅限于细胞核内。上述研究为进一步探索PB2亚单位的生物学特性及其结构与功能研究打下基础。

分类号： S852.65

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